[发明专利]一种微环境敏感型荧光探针及其制备方法和应用

说明书

本发明属于微环境敏感型有机小分子荧光探针的设计及生物应用技术领域，公开了一种微环境敏感型荧光探针及其制备方法和应用，通过本发明方法制备得到分子式为C₂₆H₁₈N₂OS₃和C₂₂H₁₆N₂OS₂两个微环境敏感型探针。本发明微环境敏感型荧光探针合成简单，对微环境敏感，对HSA检测选择性好，灵敏度高，线性范围宽。此外，利用探针分子在低极性环境中较强的荧光信号，本发明荧光探针也能够靶向低极性的脂滴，并且通过探针分子在癌细胞和正常细胞中的脂滴成像，实现了癌细胞和正常细胞的区分，有能力用于潜在的癌症诊断；更进一步，分子式为C₂₆H₁₈N₂OS₃的探针分子还成功地用于活体斑马鱼中的脂滴成像。

技术领域

本发明属于微环境敏感型有机小分子荧光探针的设计及生物应用技术领域，具体为一种微环境敏感型荧光探针及其制备方法和应用。

背景技术

细胞的重要组成部分，如蛋白质、核酸、细胞器等都有独特的分子结构并形成特定的生理微环境，如：人血清蛋白(HSA)形成的空腔是典型的低极性环境；癌细胞中，低极性高粘度的脂滴(LDs)数量会增多。当生物大分子、细胞器等浓度异常时，生理微环境会发生变化，引起相关疾病的发生，因此，检测生理微环境的变化非常重要。而微环境敏感型小分子荧光探针越来越成为研究热点之一。对此，有必要发明一种用于检测生理微环境变化的微环境敏感型荧光探针。

发明内容

针对上述问题本发明提供了一种微环境敏感型荧光探针及其制备方法和应用。

为了达到上述目的，本发明采用了下列技术方案：

本发明提供一种微环境敏感型荧光探针，所述探针为D-π-A结构的新型有机小分子荧光探针，具有TICT特征，其分子式为C₂₆H₁₈N₂OS₃，结构式为或分子式为C₂₂H₁₆N₂OS₂，结构式为

本发明提供一种微环境敏感型荧光探针的制备方法，所述分子式为 C₂₆H₁₈N₂OS₃，结构式为的微环境敏感型荧光探针的制备方法包括以下步骤：

步骤1，将4-(二苯基氨基)苯基硼酸，5-溴噻吩-2-甲醛和四三苯基磷钯溶解在1，4-二氧六环(1,4-dioxane)和碳酸钠水溶液组成的混合溶液中，于氮气氛围中持续搅拌加热回流，通过TLC确认反应完成后，将混合物冷却至室温，过滤，收集得到的滤液用二氯甲烷萃取三次，饱和食盐水洗涤两次，收集有机相，用无水Na₂(SO₄)干燥，旋干，柱色谱纯化得到黄色化合物1，即5-(4-(二苯基氨基)苯基)噻吩-2-甲醛(TPA-TA)；

步骤2，将TPA-TA、罗丹宁和尿素溶于无水乙醇中，将混合物搅拌加热回流，通过TLC确认反应完成后，将冷却至室温的混合物过滤，用冷乙醇洗涤得到绿色固体化合物2(TPA-TRDN)，即为所述微环境敏感型荧光探针，

本发明提供一种微环境敏感型荧光探针的制备方法，所述分子式为C₂₂H₁₆N₂OS₂，结构式为的微环境敏感型荧光探针的制备方法包括以下步骤：将对二苯氨基苯甲醛、罗丹宁和尿素溶于无水乙醇中；将上述混合溶液持续搅拌加热回流；通过TLC确认反应完成后，将冷却至室温的混合物过滤，用冷乙醇洗涤得到红色固体(DPAR)，即为所述微环境敏感型荧光探针，