[发明专利]一种荧光与长余辉联合检测的免疫层析方法及系统

说明书

本发明公开了一种荧光与长余辉联合检测的免疫层析方法及系统，属于免疫分析的技术领域。激发光源照射免疫层析试纸条，测定荧光信号强度，当检测线处最大荧光强度值小于免疫分析仪器的阈值时，将荧光发光强度与预存的待测目标物浓度‑荧光发光强度标准曲线拟合，得到待测目标物浓度；大于或等于阈值时，关闭光源并收集长余辉信号强度，与预存的待测目标物浓度‑长余辉发光强度标准曲线拟合，得到待测目标物浓度。本发明检测方法最大程度地拓宽了检测区间，有效增大荧光免疫层析的应用范围。

技术领域

本发明属于免疫分析的技术领域，特别涉及一种荧光与长余辉联合检测的免疫层析方法及系统。

背景技术

传统荧光免疫试纸条的检测范围仅为2～3个数量级。因检测范围有限，当面对待检测物质的含量变化范围极大时，市售的荧光免疫层析试纸条并不能完成准确的测试。另外，目前现有荧光免疫检测方法中适用的仪器检测器阈值有限，例如基于拍照式成像的免疫层析分析仪、时间分辨免疫层析分析仪，可准确检测的信号下限至阈值上限也只有2～3个数量级(～100至～60000)，相关检测仪器在测试含量水平跨度更宽的待检物时，所检测到信号的线性范围受限，常常不能满足测试需要。

例如，在孕期持续跟踪中HCG的含量会发生显著的变化，最高水平的HCG含量相比于孕初期会有5个数量级的增加，传统的试纸条在远低于最高水平时已经趋于饱和，其高浓度区的定量准确性变得非常差。甚至，当样本中HCG浓度过高时，还会出现假阴性的结果。

因此，现有的免疫层析方法和系统难以同时兼顾高的灵敏度和宽的检测区间，限制了基于发光信号进行定量检测的应用范围。

发明内容

本发明提供一种荧光与长余辉联合检测的免疫层析方法及系统，解决现有的免疫层析方法和系统难以同时兼顾高的灵敏度和宽的检测区间的问题。

为了解决上述问题，本发明提供如下方案：

S1、准备试纸条：

试纸条结合垫上标记有长余辉纳米微球偶联的生物标志物Ⅰ，检测线上标记生物标志物Ⅱ，质控线上标记活性检测物；

所述生物标志物Ⅰ、生物标志物II分别用于与待测目标物特异性结合；

所述活性检测物用于指示结合垫上标记物的有效性；

S2、上样：

于步骤S1准备的试纸条上滴加含有待测目标物的待测样品，至反应完成；

S3、使用荧光免疫分析仪器进行检测：

光源照射经步骤S2上样后的试纸条，测定检测线与质控线处的荧光信号强度，分别获得检测线处最大峰值对应的最大荧光强度值H_T，质控线处最大峰值对应的最大荧光强度值H_C；

S4、比较检测线处最大荧光强度值H_T与荧光免疫分析仪器的阈值D_T；

当H_T小于阈值D_T时，将荧光发光强度与预存的待测目标物浓度-荧光发光强度标准曲线拟合，得到待测目标物浓度；

当H_T大于或等于阈值D_T时，关闭光源，测定检测线与质控线处的长余辉信号强度；将长余辉发光强度与预存的待测目标物浓度-长余辉发光强度标准曲线拟合，得到待测目标物浓度。

荧光与长余辉均属于长余辉纳米微球在光源激发作用下的发射光，其中荧光是光源开启时的即时发光，长余辉是光源关闭后的延时发光，对采集荧光信号或长余辉信号所需的探测器可以是相同的。检测线处最大峰值指示着长余辉纳米微球中发光剂量的多少，对应着指示长余辉纳米微球量的多少，进一步地可指示长余辉纳米微球上偶联物的量，检测线处长余辉纳米微球偶联物的量即对应待测目标物的量。