[发明专利]一种新型哺乳动物的异源抗原的筛选方法及其应用

说明书

本发明公开了一种新型哺乳动物的异源抗原的筛选方法及其应用，本发明通过对待测样本进行2D SDS‑PAGE蛋白电泳和2D Western blot筛选，并将2DSDS‑PAGE蛋白电泳结果图和2D Western blot的结果图进行拟合，筛选重合点，进行挖点，并进行蛋白质谱鉴定和搜库比对，即得异源抗原，本发明所述的筛选方法为免疫排斥原因排查和后续操作提供了有力的参考和支持，具有非常好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体而言，本发明涉及一种筛选方法，更具体地，本发明涉及一种新型哺乳动物的异源抗原的筛选方法及其应用。

背景技术

随着移植免疫学的发展和外科技术的成熟，器官、组织或细胞移植也逐渐兴起，器官、组织或细胞移植分为同种移植和异种移植，其中，同种移植一般是指同种异体移植，即同种不同基因型个体之间的器官、组织或细胞的移植，也是临床上最常见的移植类型之一；异种移植是指将一个物种的器官、组织或细胞移植到另一个物种体内。无论是同种移植还是异种移植，均存在免疫排斥的现象，免疫排斥是指受者进行同种或异种器官、组织或细胞的移植后，外来的器官、组织或细胞等移植物作为一种“异己成分”被受者免疫系统识别，后者发起针对移植物的攻击、破坏和清除的免疫学反应。同种移植或异种移植的成功率的关键取决于受者和供者的器官、组织或细胞之间是否发生免疫排斥反应以及免疫排斥反应的强弱，因此，目前该领域亟需一种准确可靠、方便快捷的异源抗原的筛选方法，以用于筛选出免疫排斥相关的抗原，进而为免疫排斥原因排查和后续操作提供有力的参考。

血清蛋白质组分析(Serological proteome analysis，SERPA)技术是蛋白质组学与免疫学结合产生的一种高通量筛选和鉴定疾病相关抗原、抗体的新技术，目前被广泛应用于抗原和抗体的筛选和鉴定中，SERPA技术的主要原理是首先经二维凝胶电泳(2-DE)方法分离蛋白样品，并保证三块2-DE平行胶同时进行，每块凝胶的蛋白上样量一致。其中两块胶转到硝酸纤维素膜或聚偏氟乙烯膜上，然后分别用患者或正常对照血清与膜杂交进行血清免疫学分析，第三块未转膜的凝胶进行考马斯亮蓝染色，通过软件分析2-DE蛋白质印迹结果鉴别出患者血清与对照血清的免疫反应差异点，同时在介体胶中确定其对应的差异点，主要包括在患者血清唯一出现的点和在患者血清中升高明显的点。最后从介体胶上切取差异点进行鉴定，鉴定的方法包括Edman降解法以及敏感性和特异性高的质谱鉴定法。

目前，现有的筛选和鉴定抗原、抗体的SERPA技术存在以下缺陷：(1)SE RPA技术未明确血清来源，文献中一般描述为采用患者及对照血清进行分析；(2)SERPA技术未明确标记时血清的处理方式，文献中一般描述为采用患者及对照血清做一抗；(3)SERPA技术未明确图片拟合方式；此外，目前还存在考马斯亮蓝染色的2D胶不能做转膜，无法和抗体孵育，而转完膜并用抗体孵育做Wes tern blot的膜无法直接做质谱等问题，鉴于此，本发明的目的在于克服目前本领域存在的上述技术缺陷，提供一种新的异源抗原的筛选方法，以用于筛选出免疫排斥抗原，进而为免疫排斥原因排查和后续操作提供有力的参考和支持。

发明内容

鉴于此，为了弥补当前本领域现有技术存在的上述技术缺陷，本发明的目的在于一种新的异源抗原的筛选方法，以用于筛选出免疫排斥抗原，进而为免疫排斥原因排查和后续操作提供有力的参考和支持。

本发明的上述目的通过以下技术方案得以实现：

本发明的第一方面提供了一种筛选免疫排斥抗原的方法。

进一步，所述方法包括如下步骤：

(1)对待测样本进行2D SDS-PAGE蛋白电泳和2D Western blot筛选；

(2)将2D SDS-PAGE蛋白电泳结果图和2D Western blot的结果图进行拟合，筛选重合点，进行挖点，进行蛋白质谱鉴定；

优选地，步骤(1)所述的在进行2D SDS-PAGE蛋白电泳之前，先做等电聚焦电泳。