[发明专利]一种新型哺乳动物的异源抗原的筛选方法及其应用

权利要求书

1.一种筛选免疫排斥抗原的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)对待测样本进行2D SDS-PAGE蛋白电泳和2D Western blot筛选；

(2)将2D SDS-PAGE蛋白电泳结果图和2D Western blot的结果图进行拟合，筛选重合点，进行挖点，进行蛋白质谱鉴定。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法中每次做两张2DSDS-PAGE蛋白电泳胶；

优选地，所述两张2D SDS-PAGE蛋白电泳胶中一张做考马斯亮蓝染色、或银染；

优选地，所述两张2D SDS-PAGE蛋白电泳胶中另一张做转膜后，做2DWestern blot。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述2D Western blot是采用受者的血清或血清提取物进行的；

优选地，所述受者血清或血清提取物为直接标记的血清或血清提取物；

更优选地，所述受者血清或血清提取物为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖甙酶、或葡萄糖氧化酶直接标记的血清或血清提取物；

最优选地，所述受者血清或血清提取物为辣根过氧化物酶直接标记的血清或血清提取物。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述拟合的方式为将2D SDS-PAGE蛋白电泳结果图和2D Western blot的结果图中以某几个蛋白点及印迹点为参考进行图片的拟合；

优选地，步骤(2)中所述拟合还包括对拟合后的蛋白点进行一一标记。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的待测样本为细胞、或组织。

优选地，步骤(1)中所述的方法还包括对待测样本进行膜蛋白的提取。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括如下步骤：

(a)对待测样本的膜蛋白进行1D SDS-PAGE蛋白电泳；

(b)采用受者血清或血清提取物对步骤(a)中的膜蛋白进行1D Western blot；

(c)将步骤(a)和步骤(b)得到的结果作为2D SDS-PAGE蛋白电泳和2DWestern blot筛选的参考；

优选地，步骤(b)中所述的受者血清或血清提取物为直接标记的血清或血清提取物；

更优选地，所述受者血清或血清提取物为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖甙酶、或葡萄糖氧化酶直接标记的血清或血清提取物；

最优选地，所述受者血清或血清提取物为辣根过氧化物酶直接标记的血清或血清提取物。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的2D Western blot包括如下步骤：

(a)将2D SDS-PAGE蛋白电泳胶进行转膜；

(b)用封闭液室温下封闭1h、或4℃条件下封闭过夜；

(c)加入直接标记的受者血清或血清提取物进行孵育，室温下孵育1h、或4℃条件下孵育过夜；

(d)孵育结束后，取出膜，并用TBST洗涤缓冲液洗涤3次，每次5min；

(e)将发光液A液和B液混合均匀后，滴在膜上进行显影；

(f)在暗室中，将胶片置于膜上，盖上压片夹进行曝光，曝光后将胶片放入显影液中进行显影。