[发明专利]一种透明质酸寡糖组合物及其制备方法和用途

说明书

本发明提供一种透明质酸寡糖组合物及其制备方法和用途，其中所述透明质酸寡糖组合物包括还原端为糖醛酸结构的透明质酸寡糖。该透明质酸寡糖组合物可以提高神经酰胺的合成和或透明质酸合成酶1(HAS1)和/或透明质酸合成酶3(HAS3)的表达。本发明通过将酶解反应耦联超滤、纳滤可以使酶解得到的寡糖及时从酶解体系中分离出来，减少寡糖对酶解的抑制作用，提高酶解效率，缩短酶解时间。酶解完后，利用超滤把酶截留下来可以再重复利用1‑2次，提高酶的重复利用度，同时省掉了加热灭酶活阶段，减少了加热对寡糖活性的影响，使寡糖的活性得到最大化的保留。减少活性炭加入量，减少了对操作人员的炭污染，简化了纯化工艺。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体地，涉及一种透明质酸寡糖组合物及其制备方法和用途。

背景技术

透明质酸(hyaluronic acid，HA)是一种酸性黏多糖，是由N-乙酰葡糖胺和D-葡糖醛酸双糖重复单位通过β-(1→4)糖苷键和β-(1→3)糖苷键构成的无分支高分子糖胺聚糖，存在于动物组织细胞间质和某些细菌的荚膜中。透明质酸广泛用于医药、化妆品、食品等领域，分子量一般为10⁵～10⁷道尔顿(Da)。

不同分子量的透明质酸表现出不同的生物活性，低分子量透明质酸甚至表现出与高分子量透明质酸完全相反的活性。很多文献都对透明质酸在创伤修复中发挥的作用进行了报道，尤其是低分子量及透明质酸寡糖作为活性物质受到更多关注。因利用酸法、碱法等制备透明质酸寡糖如果应用于大规模生产的话，有较高的风险，可能对操作人员或设备造成伤害，利用酶切法制备寡糖有着更大的优势。

对于还原端为糖醛酸的透明质酸四糖，尤其是包含HA2-12的透明质酸寡糖混合物(糖醛酸还原端)制备及功效研究报道较少。专利CN 111040048A公开了一种超低分子量透明质酸及其制备方法，该专利没有及时将酶解过程产生的寡糖分离出来，而这存在的寡糖会对酶解正向反应造成一定的抑制，造成酶解时间的延长，增加了后期纯化的难度。该专利同时也没披露其在促进透明质酸合成酶以及神经酰胺合成方面的作用。

另外，物质的结构对其生物活性会产生影响，寡糖类物质亦是如此。

非专利文献1批露了硫酸化透明质酸(sHA)具有良好的生物学功能，特定的硫酸化模式在调节糖胺聚糖和蛋白质之间的结合模式中起着关键作用，证明了带有6-O-硫酸化(sHA-6S)的sHA四糖，在体外促进大鼠E18海马神经元轴突生长方面具有重要作用。

非专利文献2采用荧光偏振竞争测定来分析合成化合物的相对结合亲和力，并揭示了合成硫酸软骨素样四糖和中期因子之间具有相互作用。可以看出透明质酸寡糖(HAOs)聚合度或者残基的不同，会产生不同的生物活性功能。这是值得去深入研究的。现有技术中，尚未有具有糖醛酸端基的超小分子量透明质酸对神经酰胺和透明质酸酶合成方面影响的研究。

非专利文献3通过改变盐酸浓度，选择性地产生具有不同聚合度和还原端的透明质酸寡糖(HAOs)，使用MOE软件对HAOs与CD44和TLR4进行分子对接模拟的数据表明，HAOs与CD44和TLR4的结合能力随着HAOs的聚合度增加而增加，同时当HAOs的还原端为GlcNAc残基时结合能力显着增加，而当还原端为GlcA残基时结合能力没有显著变化。

非专利文献1：Unravel a neuroactive sHA sulfation pattern withneurogenesis activity by a library of defined oligosaccharides.Yao,W.,Chen,M.,Dou,X.,Jin,H.,Zhang,X.,Zhu,Y.,... Li,Z.(2019).Unravel a neuroactive sHAsulfation pattern with neurogenesis activity by a library of definedoligosaccharides.European journal of medicinal chemistry,163,583-596.