[发明专利]一种利用解脂耶氏酵母菌转化柠檬烯生成紫苏酸的方法

说明书

本发明涉及紫苏酸生产方法领域，具体公开了解脂耶氏酵母菌利用柠檬烯生成紫苏酸的方法，通过将解脂耶氏酵母菌接种于改良沙保氏培养基中培养，并加入R‑(+)‑柠檬烯，然后转化，离心，萃取后蒸干浓缩，获得紫苏酸。本发明的方法简单，成本低，产量高，获得的紫苏酸为单一构型的，是生物合成的属于天然产物范畴的紫苏酸，具有较高的价值。

技术领域

本发明涉及紫苏酸生产方法领域，具体涉及一种利用解脂耶氏酵母菌转化柠檬烯生成紫苏酸的方法。

背景技术

紫苏酸是一种化学物质，分子式是C10H14O2，对于紫苏酸的生产，现有技术中已经有关于微生物可以将(+)-柠檬烯转化生成紫苏酸的相关记载，例如，有研究表明Pseudomonas putida GS1可以将(+)-柠檬烯生成紫苏酸，Arxula adeninivorans CSIR Y-1149和Yarrowia lipolytica CBS 599T均能生成紫苏酸。还有Pseudomonas putida DSM12264，采用流化床离子交换色谱柱进行产物原位分离技术进行连续化转化生产紫苏酸，但是对于能够转化柠檬烯生成紫苏酸的菌株单一，大部分产量也较低，且生产紫苏酸的成本相对较高。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种利用解脂耶氏酵母菌转化柠檬烯生成紫苏酸的方法，通过解脂耶氏酵母在一定的条件下对于柠檬烯转化生产紫苏酸，产量高，成本低，工艺简单。

本发明提供了一种利用解脂耶氏酵母菌转化柠檬烯生成紫苏酸的方法，具体包括如下步骤：

S1，将解脂耶氏酵母菌进行活化和纯化；

所述解脂耶氏酵母菌的菌种保藏编号为CICC 1444；

S2，将纯化后的解脂耶氏酵母菌事先在50mL沙保氏培养基中在 30℃、200rpm下培养24h(OD₆₀₀＝0.2～0.3)作为种子液，按照接种量3-4％ (vol/vol)接种于发酵培养基中培养46-50h，加入体积分数为0.5-2.0％的R- (+)-柠檬烯，然后转化46-50h，离心，萃取后蒸干浓缩，获得紫苏酸；

所述种子培养基配方为：40g/L葡萄糖、10g/L蛋白胨，水1000 mL，pH4.0-6.0；

所述发酵培养基配方为：40g/L甘蔗糖蜜，10g/L蛋白胨，水 1000ml，pH4.0-6.0。

进一步地，S2中，解脂耶氏酵母菌接种于种子培养基中的培养条件为于 30℃，200rpm。

进一步地，S2中，解脂耶氏酵母菌接种于发酵培养基中的培养温度为 30℃。

进一步地，S2中，所述R-(+)-柠檬烯事先用等体积无水乙醇溶解。

进一步地，S2中，离心条件为：10,000转/分，离心时间10分钟。

进一步地，萃取过程取等量乙酸乙酯对离心获得的上清液进行萃取。

进一步地，S2中，蒸干浓缩过程具体为：真空度为0.1MPa下，蒸发温度为40℃。

进一步地，S2中，将纯化后的解脂耶氏酵母菌接种于发酵培养基中培养 48h，，转化时间为48h。

本发明还提供了一种由上述方法制备得到的紫苏酸。

本发明还提供了一种所述的紫苏酸在制备抑癌药物中的用途。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

1、本发明中利用甘蔗糖蜜代替传统的葡萄糖制备培养基，有利于降低成本。