[发明专利]一种宏基因组样本去宿主化的试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于宏基因组样本去宿主化的试剂盒，其包含细胞处理剂、消化缓冲液以及DNA消化酶，其特征在于，所述细胞处理剂包含胰酶以及毛地黄皂苷，所述胰酶在所述细胞处理剂中的浓度为0.2～2g/mL，所述毛地黄皂苷在所述细胞处理剂中的浓度为1～2.5％，百分比的单位为g/mL。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述胰酶的浓度为1g/mL，所述毛地黄皂苷的浓度为2％。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述消化缓冲液包含1.5～3M NaCl、80～160mM MgCl₂、150～265mM Tris-HCl、50～75mM MnSO₄、10～30mM DTT以及0.05～0.3％BSA；百分比单位为g/mL。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述消化缓冲液包含2.5M NaCl、125mMMgCl₂、187.5mM Tris-HCl、62.5mM MnSO₄、25mM DTT以及0.25％BSA；百分比为质量体积百分比，单位为g/mL。

5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述DNA消化酶包含浓度为250U/μL的全能核酸酶以及25U/μL的HL-SAN。

6.如权利要求1～5任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括样本前处理液；所述样本前处理液较佳地为DTT或PBS。

7.一种宏基因组样本去宿主化中宿主细胞裂解的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤(1)将处理样本与权利要求1中所定义的细胞处理剂、消化缓冲液以及DNA消化酶混合；

步骤(2)混匀、孵育，离心后弃上清；

步骤(3)加入PBS，混匀后弃上清；

步骤(4)加入裂解混合液悬浮沉淀；

步骤(5)加入溶壁酶和蛋白酶K；

在步骤(1)所得混合体系中，胰酶的终浓度为0.2％，毛地黄皂苷的终浓度为0.01％；NaCl、MgCl₂、Tris-HCl、MnSO₄、DTT、BSA的终浓度分别为200mM、10mM、15mM、5mM、2mM、0.2％，全能核酸酶以及HL-SAN的终浓度分别为200U/mL和300U/mL；

以上百分比的单位为g/mL。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述混匀为震荡混匀。

9.如权利要求7或8所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述孵育为37℃温浴10min。

10.如权利要求1～6任一项所述的试剂盒在宏基因组去宿主化测序文库中的应用；所用样本选自痰液、肺泡灌洗液、脑脊液、组织以及胸腹水中的一种或多种。