[发明专利]一种利用液相色谱串联质谱技术检测血浆中激素的方法

权利要求书

1.一种利用液相色谱串联质谱技术检测血浆中激素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一：样品前处理：

向待测标本加入内标，混匀后加入甲醇，振荡混匀，再加入去离子水，再次振荡混匀后离心，取上清液置于96孔板萃取装置中，依次用淋洗液乙腈/水、正己烷淋洗，再用洗脱液乙腈/甲醇、水依次洗脱；

步骤二：根据激素类化合物化学和物理特性，采用超高效液相色谱串联四级杆质谱仪进行检测；

步骤三：定性判断和定量分析：

根据目标激素与其内标物的相对保留时间、定量离子对的丰度比、目标激素的定性离子与定量离子的丰度比，来判断激素是否存在于血浆样品中。

2.根据权利要求1所述的一种利用液相色谱串联质谱技术检测血浆中激素的方法，其特征在于，所述步骤一中淋洗液乙腈/水的体积比(V:V)为5:95～20:80，所述的洗脱液乙腈/甲醇体积(V:V)比为95:5～80:20。

3.根据权利要求1所述的一种利用液相色谱串联质谱技术检测血浆中激素的方法，其特征在于，所述步骤一中对加入甲醇和去离子水后的离心的条件包括，室温下8000～12000g离心5～10min。

4.根据权利要求1所述的一种利用液相色谱串联质谱技术检测血浆中激素的方法，其特征在于，所述步骤二中液相色谱条件包括：C8色谱柱,100mm x 2.1mm,1.7μm，色谱柱柱温：45℃，流动相组成：A，0.1mM NH4F；B，甲醇，流速：0.4mL/min，并制定梯度洗脱条件。

5.根据权利要求1所述的一种利用液相色谱串联质谱技术检测血浆中激素的方法，其特征在于，所述步骤二中质谱检测条件采用负离子模式，扫描方式采用多反应监测离子扫描，并检测目标定量母子离子对和内标定量母子离子对。

6.根据权利要求5所述的一种利用液相色谱串联质谱技术检测血浆中激素的方法，其特征在于，所述质谱离子源参数包括：气体，脱溶剂气为氮气，碰撞气为氩气；毛细管电压：3.5kV；采样锥孔电压：20～80V；碰撞能量：15～60V；脱溶剂气流速：800～1000L/h；锥孔反吹气：100L/h；脱溶剂气温度：500℃。

7.根据权利要求1所述的一种利用液相色谱串联质谱技术检测血浆中激素的方法，其特征在于，所述步骤三中应用超高效液相色谱串联四级杆质谱法对样品进行定性分析，在相同实验条件下，样品中待测目标物的色谱保留时间与标准品溶液中相应物质的色谱保留时间一致；样品总离子流色谱图中所选择的检测离子对的相对丰度与相当浓度标准溶液的离子相对丰度比的偏差不超过规定范围，则判断样品中存在相应的目标化合物。

8.根据权利要求7所述的一种利用液相色谱串联质谱技术检测血浆中激素的方法，其特征在于，所述步骤三中采用同位素内标定量法，以激素与其内标物的峰面积比值计算样品中的激素的含量。