[发明专利]用于识别、富集和/或扩增抗原特异性T细胞的试剂和方法

说明书

本申请涉及用于识别、富集和/或扩增抗原特异性T细胞的试剂和方法。包括天然T细胞并且包括稀少前驱细胞的抗原特异性T细胞在培养液中富集和扩增。富集和扩增提供通过过继转移用于更有效的免疫治疗的平台，以及通过测定与候选肽抗原的库的T细胞反应性用于个性化免疫治疗的平台。

本申请是分案申请，原申请的申请日为2015年9月17日，申请号为201580063354.3，发明名称为“用于识别、富集和/或扩增抗原特异性T细胞的试剂和方法”。

技术领域

本申请的主题涉及免疫治疗，并且涉及公开于2014年3月13日提交的PCT/US2014/25889中的主题，其中的内容以引入方式并入。

背景技术

抗原特异性T细胞的扩增因抗原特异性幼稚前体的稀有性而复杂，其可仅为百万分之一。为了产生过继治疗所需要的大量的肿瘤特异性T细胞(例如)，淋巴细胞通常用抗原刺激多周，常常接着在劳动密集过程中的T细胞选择和亚克隆。

出于治疗和诊断目的两者，存在对可从幼稚前体快速产生大量和高频率抗原特异性T细胞，或快速识别T细胞应答以候选肽抗原的技术的需要。

发明内容

在各种方面，本发明提供在培养液中，包括从幼稚T细胞并且包括从稀少前驱细胞快速富集和扩增抗原特异性T细胞。本发明由此提供用于更有效免疫治疗(例如通过过继转移)的平台。本发明通过确定对候选肽抗原库的T细胞反应性，进一步提供用于快速识别来自患者淋巴细胞的抗原特异性T细胞应答的平台和用于个性化免疫治疗的平台。

在各种实施例中本发明采用纳米级人工抗原呈递细胞(aAPC)，其捕获刺激信号并且将其传递到免疫细胞，如抗原特异性T淋巴细胞，如CTL。存在于aAPC上的信号可包括信号1，在主要组织相容性复合体(MHC)的情形下呈递的抗原肽(I类或II类)；以及信号2，调节T细胞应答的一种或多种共刺激配体。在一些实施例中信号2为通过CD28结合并且活化的配体。在各种实施例中，粒子材料为顺磁性的并且优选地为生物兼容性的，如聚葡萄糖涂布的氧化铁粒子。顺磁性的粒子允许磁性捕获或通过施加磁场“富集”，以及在富集的细胞部分内活化和后续扩增抗原特异性淋巴细胞，其另外通过施加磁场增强。

在一些方面，本发明提供用于制备抗原特异性T细胞群的方法。所述方法包含提供包含来自患者的T细胞的样品。在一些实施例中，患者需要抗原特异性T细胞的过继转移。样品可为PBMC样品，或通过白细胞去除术获得的样品。样品可富集所关注的T细胞，如CD8+T细胞和/或幼稚T细胞。含有T细胞的样品与呈递所关注的疾病(例如肿瘤型)常见的抗原和/或呈递基于个人化选择的一种或多种抗原的顺磁性aAPC的群接触。在某些实施例中，每个aAPC珠粒呈递单个抗原，并且各自呈递不同抗原的aAPC珠粒的混合液用于富集/扩增。顺磁性特性用于通过邻近放置磁体针对特异性T细胞捕获或“富集”抗原样品以由此分离aAPC-缔合细胞与非缔合细胞。回收的T细胞可通过具有aAPC的培养液体外扩增，并且抗原特异性细胞的扩增通过磁场的存在进一步增强。富集和扩增过程可重复一次或多次，用于抗原特异性细胞的理想扩增(以及进一步纯化)。

在某些实施例中，所述方法提供抗原特异性T细胞的约1000至10,000倍扩增(或更多)，其中大于约10⁸抗原特异性T细胞在例如1至3周里产生。所得细胞可向患者给药以治疗疾病。抗原特异性频率为在转移之后对于理想扩增的独特重要的参数，因为竞争来自无关的共同转移的细胞的生长信号可显著减弱所关注的抗肿瘤T细胞的动态平衡扩增。

在另外其它方面，本发明提供用于基于个人化选择T细胞抗原的方法。举例来说，各自呈递候选抗原肽的aAPC的阵列或库用来自受试者或患者的T细胞筛选，并且确定或定量T细胞对每个aAPC-肽的应答。T细胞应答可例如通过细胞因子表达或T细胞活化的其它替代标记的表达定量。示例性的测定平台包括免疫化学，如ELISA，或已表达基因的扩增，例如通过RT-PCR。在其它实施例中，T细胞活化通过测量指示T细胞活化(如钙信号传递)的胞内信号传递事件定量。此类测定可采用本领域中已知的任何多种比色测定。