[发明专利]一种核酸检测试剂盒及其使用方法

说明书

本发明公开了一种核酸检测试剂盒及其使用方法，包括第一试剂；所述第一试剂中包括：无核酸酶超纯水，引物探针mix，三羟甲基氨基甲烷盐酸盐10～100mM，一价阳离子20～120mM，二价阳离子1～10mM，牛血清白蛋白0.05～1mg/ml，脱氧核糖核苷三磷酸0.1～0.8mM，氨基乙酸2～30mM，天然糖0.05～0.5M，三糖质量浓度5～20％，MMLV酶10～100U/test，Taq酶1～5U/test，UNG酶0.1～1U/test。本发明通过对检测试剂中的各组分及其用量进行筛选优化，得到了一种扩增效率和检测灵敏度均显著提高的检测试剂盒，并且该试剂盒可兼容多种不同核酸的检测，可常温运输，常温储存，操作简单，具有极高的市场应用价值。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种核酸检测试剂盒及其使用方法。

背景技术

病毒检测是各国不可或缺的重要软实力，世界各地对疾病诊断的完成速度、检验窗口期、检验灵敏度以及大量检验涉及到的运输及储存问题均有较高要求。

酶联免疫法(ELISA Enzyme-Linked Immunosorbnent assay)是临床上较为常用的检测方式，此方法对待检病毒载量要求较高，往往存在窗口期，容易导致漏检或错过最佳诊疗时间。近年来，核酸检测技术由于其灵敏度高、特异性好，且检测时间短，已经慢慢普及并为直接检测病毒提供了新的方法，目前应用于临床检测的常见核酸检测技术包括荧光PCR、反向斑点杂交技术、液相芯片技术、恒温扩增技术、微流控芯片技术、测序技术等，具体技术原理在这里不作赘述。理论上讲，只要样本有一个拷贝的目的靶标存在，PCR检测体系就能识别到，核酸平台的普及解决了免疫学检测的“窗口期”问题，极大地提高了诊疗系统判读效率，一些高敏试剂盒对用药后效果监测也起到很有效的辅助作用，目前已经越来越被行业重视并广泛采用。

随着核酸技术的普及，专业人员已经不再满足于常规的检测条件，对核酸检测技术各方面的升级也成为了时下研究的热点课题，目前常规核酸提取试剂经过市场的检验，大致存在以下共性问题：1)检测时间过长，至少需要1h-1.5h；2)灵敏度普遍不够高，一般在500copy/ml以上；3)试剂需要冷链运输；4)试剂储存条件一般为-20℃以下，存在反复冻融性能衰减或失效的问题；5)试剂开封后仍需技术人员分液至单管检测，操作步骤相对繁琐。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种核酸检测试剂盒，通过对检测试剂各组分及其用量进行筛选优化，得到了一种扩增效率和检测灵敏度均显著提高的检测试剂盒，并且该试剂盒可兼容多种不同核酸的检测，可常温运输，常温储存，操作简单，具有极高的市场应用价值。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

本发明提供了一种核酸检测试剂盒，包括：第一试剂；

所述第一试剂中包括：无核酸酶超纯水，引物探针mix，三羟甲基氨基甲烷盐酸盐10～100mM，一价阳离子20～120mM，二价阳离子1～10mM，牛血清白蛋白0.05～1mg/ml，脱氧核糖核苷三磷酸0.1～0.8mM，氨基乙酸2～30mM，天然糖0.05～0.5M，三糖质量浓度5～20％，MMLV酶10～100U/test，Taq酶1～5U/test，UNG酶0.1～1U/test。

进一步地，所述第一试剂中包括：无核酸酶超纯水，引物探针mix，三羟甲基氨基甲烷盐酸盐20～50mM，一价阳离子40～80mM，二价阳离子2～6mM，牛血清白蛋白0.05～0.2mg/ml，脱氧核糖核苷三磷酸0.15～0.3mM，氨基乙酸0.8～1.3mM，天然糖0.05～0.15M，三糖质量浓度6～15％，MMLV酶40～100U/test，Taq酶2～4U/test，UNG酶0.15～0.3U/test。