[发明专利]一种核酸检测试剂盒及其使用方法在审
申请号: | 202111072776.0 | 申请日: | 2021-09-14 |
公开(公告)号: | CN113736919A | 公开(公告)日: | 2021-12-03 |
发明(设计)人: | 叶槟源;王颖;席再军;郭海荣;方亮 | 申请(专利权)人: | 武汉明德生物科技股份有限公司 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12Q1/6848;C12R1/93 |
代理公司: | 武汉智嘉联合知识产权代理事务所(普通合伙) 42231 | 代理人: | 姜婷 |
地址: | 430074 湖北省武汉市东湖新技术开发区高*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 核酸 检测 试剂盒 及其 使用方法 | ||
1.一种核酸检测试剂盒,其特征在于,所述核酸检测试剂盒中包括:第一试剂;
所述第一试剂中包括:无核酸酶超纯水,引物探针mix,三羟甲基氨基甲烷盐酸盐10~100mM,一价阳离子20~120mM,二价阳离子1~10mM,牛血清白蛋白0.05~1mg/ml,脱氧核糖核苷三磷酸0.1~0.8mM,氨基乙酸2~30mM,天然糖0.05~0.5M,三糖质量浓度5~20%,MMLV酶10~100U/test,Taq酶1~5U/test,UNG酶0.1~1U/test。
2.根据权利要求1所述的核酸检测试剂盒,其特征在于,所述第一试剂中包括:无核酸酶超纯水,引物探针mix,三羟甲基氨基甲烷盐酸盐20~50mM,一价阳离子40~80mM,二价阳离子2~6mM,牛血清白蛋白0.05~0.2mg/ml,脱氧核糖核苷三磷酸0.15~0.3mM,氨基乙酸0.8~1.3mM,天然糖0.05~0.15M,三糖质量浓度6~15%,MMLV酶40~100U/test,Taq酶2~4U/test,UNG酶0.15~0.3U/test。
3.根据权利要求1所述的核酸检测试剂盒,其特征在于,所述第一试剂中包括:无核酸酶超纯水,引物探针mix,三羟甲基氨基甲烷盐酸盐40mM,一价阳离子60mM,二价阳离子4mM,牛血清白蛋白0.10mg/ml,脱氧核糖核苷三磷酸0.2mM,氨基乙酸1mM,天然糖0.1M,三糖质量浓度10%,MMLV酶80U/test,Taq酶3.2U/test,UNG酶0.2U/test。
4.根据权利要求1-3任一项所述的核酸检测试剂盒,其特征在于,所述一价阳离子为KCl,所述二价阳离子为MgCl2,所述天然糖为海藻糖,所述三糖为蜜三糖五水。
5.根据权利要求1所述的核酸检测试剂盒,其特征在于,所述核酸检测试剂盒中还包括:第二试剂、第三试剂和第四试剂;
其中所述第二试剂为阳性质控试剂,包括:目的核酸和TE缓冲液;
所述第三试剂为阴性质控试剂,包括:10~100mM的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液;
所述第四试剂为复溶剂,包括:50~200mM的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液。
6.根据权利要求5所述的核酸检测试剂盒,其特征在于,所述第二试剂中包括:1×104~1×106copy/mL的目的核酸。
7.根据权利要求5所述的核酸检测试剂盒,其特征在于,所述第三试剂和第四试剂中三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液的pH值为8.5。
8.如权利要求1-7任一项所述的核酸检测试剂盒在制备新型冠状病毒,或甲型流感病毒,或乙型流感病毒核酸检测试剂盒中的应用。
9.如权利要求1-7任一项所述的核酸检测试剂盒的使用方法,其特征在于,所述方法包括:
将第四试剂和第二试剂混合,震荡充分,得到阳性质控品;将第三试剂作为阴性质控品;接着将待测核酸样本、阳性质控品和阴性质控品依次加入96孔板中,并分别加入预分装好的第一试剂中,混匀,设置反应程序,进行荧光定量PCR扩增反应。
10.根据权利要求9所述的使用方法,其特征在于,所述反应程序包括:
(1)40-60℃,保持3-15min;
(2)80-100℃,保持30-5min;
(3)80-120℃,保持1-10s接着50-72℃保持10-50s;循环40-45次;
(4)30-50℃,保持10-30min。
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