[发明专利]可覆盖13种型别腺病毒的荧光定量PCR检测方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种可覆盖13种型别腺病毒的荧光定量PCR检测方法及试剂盒，该试剂盒包括特异性引物、特异性探针、内参引物、内参探针、PCR扩增试剂、试剂盒阴性对照品、试剂盒阳性对照品和无核酶水，所述特异性引物及特异性探针的结合位点在感染人呼吸道的13种型别腺病毒的全基因组的高保守区段。本发明的可覆盖13种型别腺病毒的荧光定量PCR检测方法及试剂盒可实现单管单重PCR即可同时检测感染人呼吸道的13种腺病毒，实现高覆盖度，解决了目前检测环节为了覆盖多个型别而采用的多重PCR，造成覆盖度、灵敏性、特异性、经济性、时效性不能均优的难点问题。

技术领域

本发明涉及人呼吸道病原体检测技术领域，具体来说，涉及一种可覆盖13种型别腺病毒的荧光定量PCR检测方法及试剂盒。

背景技术

人腺病毒（human adenovirus，HAdV）感染可引起多种疾病，包括肺炎、支气管炎、膀胱炎、眼结膜炎、胃肠道疾病及脑炎等，是人呼吸道感染常见的病原体之一。

人群普遍易感，主要表现为隐性感染、急性上呼吸道和下呼吸道感染，少数可发展为重症肺炎，甚至死亡。但免疫系统功能较弱或慢性呼吸系统疾病、心脏病等患者感染后引发严重疾病的风险较高，可出现重症和危重症，死亡风险较高。目前国内尚无针对人腺病毒感染的特异性抗病毒药物，临床上以对症支持、免疫调节治疗和针对并发症的治疗为主。

人腺病毒在全球普遍流行，其流行模式多变，常与人腺病毒型别、流行地区和易感人群的年龄等因素相关。人腺病毒感染一年四季均可发生，在我国北方以冬春季常见，南方以春夏季常见。

近年来，我国由人腺病毒引起的呼吸道感染暴发时有发生，个别地区出现了聚集性的重症病例。腺病毒引发的肺炎多见于6个月~５岁儿童，尤其是2岁以下儿童，自2019年以来我国部分地区儿童发生腺病毒肺炎较往年有不同程度增加，再次引起对该病的重视。

人腺病毒属于哺乳动物腺病毒属，为无包膜的双链DNA病毒，病毒颗粒呈二十面体对称结构，直径90~100 nm，可划分为A~G共7个亚属。由于不同人腺病毒对人体的组织嗜性不同，其中与呼吸道疾病相关的人腺病毒主要有 B 亚属（HAdV-3、7、11、14、16、21、55），C亚属（HAdV-1、2、5、6）和 E 亚属（HAdV-4）。人腺病毒常与其他呼吸道病毒共同感染，也有不同型别人腺病毒共同感染的报道。

近年来快速病原学检测技术的推广应用，使得腺病毒的检出率提高，早期诊断成为可能，但在治疗方面仍有诸多问题亟待解决。就现阶段而言腺病毒引发的呼吸道疾病的早识别、早确诊对降低腺病毒感染重症率、致死率至关重要。

腺病毒的传统分型方法主要为血清学分型。受制于病毒分离的培养耗时长，对操作者的熟练度和判别经验要求高，一般实验室难以开展。随着分子生物学技术的发展，出现了通过PCR 扩增和基因测序等分子手段来进行鉴定的方法。然而受限于腺病毒的型别众多，致使原本以A地区流行的基因型设计的检测试剂，无法检出B地区流行的基因型。这在全球化趋势，病毒随人员流动广泛的当下，产生在A地区有效的试剂却无法在B地区适用，造成“假阴性”，导致误诊、漏诊。

发明内容

针对相关技术中的上述技术问题，本发明提出一种可覆盖13种型别腺病毒的荧光定量PCR检测方法及试剂盒，能够克服现有技术的上述不足。

为实现上述技术目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种可覆盖13种型别腺病毒的荧光定量PCR检测试剂盒，包括特异性引物、特异性探针、内参引物、内参探针、PCR扩增试剂、试剂盒阴性对照品、试剂盒阳性对照品和无核酶水，所述特异性引物及特异性探针的结合位点在感染人呼吸道的13种型别腺病毒的全基因组的高保守区段，所述13种型别腺病毒的型别为1型、2型、3型、4型、5型、6型、7型、11型、14型、16型、21型、35型、55型；

所述特异性引物的序列如SEQ ID NO：1- SEQ ID NO：6所示；