[发明专利]基于慢病毒的猪SPP1基因载体及其构建和应用

权利要求书

1.一种基于慢病毒的猪SPP1基因载体，其特征在于，包括按照以下顺序组装的序列：

猪SPP1基因序列如SEQ ID NO.14所述；

用于起始慢病毒mRNA转录的EF-1α启动子，如SEQ ID NO.9所示；

用作荧光蛋白表达标签的CopGFP序列，如SEQ ID NO.7所示；

用于连接同时转录表达蛋白质的T2A“自我剪切”肽序列；如SEQ ID NO.6所示；

用于真核细胞筛选的嘌呤霉素抗性基因Puro序列，如SEQ ID NO.5所示；

用于增强基因的表达效率的WPRE增强型土拨鼠乙肝病毒转录后调控元件，如SEQ IDNO.4所示；

用于慢病毒包装的慢病毒3’terminal truncated LTR序列，如SEQ ID NO.11所示；

用于增强真核细胞内的复制的病毒复制子SV40 ori序列，如SEQ ID NO.3所示；

用以控制质粒复制的原核复制子pUC Ori序列，如SEQ ID NO.2所示；

含氨苄青霉素抗性基因AmpR序列，如SEQ ID NO.1所示；

用于慢病毒包装的慢病毒5’terminal truncated LTR序列，如SEQ ID NO.10所示；

用于慢病毒包装的RRE顺式元件序列，如SEQ ID NO.12所示；

用于慢病毒包装的cPPT顺式元件序列，如SEQ ID NO.13所示；

用于起始猪SPP1基因的真核转录的人CMV启动子，如SEQ ID NO.8所示。

2.一种如权利要求1所述的猪SPP1基因载体的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：

（一）将含氨苄青霉素抗性基因AmpR序列、原核复制子pUC Ori序列、病毒复制子SV40ori序列、用于增强基因的表达效率的WPRE增强型土拨鼠乙肝病毒转录后调控元件、嘌呤霉素抗性基因Puro序列、T2A“自我剪切”肽序列、荧光蛋白表达标签的CopGFP序列、用于慢病毒包装的慢病毒包装顺式元件cis、人巨细胞病毒CMV启动子、用于起始慢病毒mRNA转录的EF-1α启动子克隆到慢病毒骨架质粒上；

(二) 将猪SPP1基因经过重组反应克隆至慢病毒骨架质粒上，得到表达猪SPP1基因的重组慢病毒质粒。

3.一种如权利要求1所述的猪SPP1基因载体的应用，其特征在于：将猪SPP1基因载体转染猪的前体脂肪细胞，用于研究猪SPP1基因的生物学功能。