[发明专利]一种铂类药物代谢标志物的基因多态性检测试剂盒及其检测方法和应用

说明书

本发明公开了一种铂类药物代谢标志物的基因多态性检测试剂盒及其检测方法和应用，其中，所述铂类代谢标志物包括ERCC1T354C、ERCC1C8092A、XRCC1A1196G三个位点的基因多态性，试剂盒针对ERCC1T354C、ERCC1C8092A、XRCC1A1196G的基因多态性设计特异性扩增引物和测序引物。本发明一方面采用提取扩增同管的方式，免去提取多次移管、核酸丢失风险；另一方面通过加入抗抑制剂进行快速恒温扩增；第三方面采用多重PCR扩增ERCC1T354C、ERCC1C8092A、XRCC1A1196G三个位点，同时一次反应进行三个位点的焦磷酸测序，以快速DNA制备、恒温PCR扩增和焦磷酸测序技术为组合对铂类疗效与不良反应预测的基因多态性进行检测，为临床个性化用药给出基因角度的建议。

技术领域

本发明涉及一种铂类药物代谢标志物的基因多态性检测试剂盒及其检测方法和应用，属于基因检测领域。

背景技术

铂类药物是作用较强的抗肿瘤药物，广泛应用于肺癌、大肠癌、卵巢癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤的治疗，取得了显著的疗效。铂类药物进人细胞后，与DNA结合形成加合物，造成DNA交联损伤，从而抑制细胞分裂，诱导细胞凋亡。铂类的药理作用不具有靶向性，在杀伤肿瘤细胞同时对机体正常细胞也会造成很大伤害，因此在临床应用中常导致严重的毒性反应，如神经毒性、肾毒性、胃肠毒性、骨髓抑制和耳毒性等。临床研究发现，在化疗方案与用药剂量相同的情况下，铂类化疗导致的毒性具有较大的个体差异，而这种差异在一定程度上与个体遗传多态性相关。

核苷酸切除修复途径DNA损伤修复在肿瘤的化疗耐药方面可能起着非常重要的作用，DNA损伤修复过程异常复杂，包括DNA损伤的识别、受损片段的切除、新DNA链的合成和新链DNA与母链的连接等。在人类细胞中，由化学药物造成的DNA损伤主要通过NER途径修复，且现己明确ERCCI基因是核苷酸切除修复的关键基因。ERCCI基因位于人类染色体19q13·2，编码由297个氨基酸组成的蛋白质。ERCCI的表达产物常与ERCC4(XPF)形成杂合二聚体ERCCI-XPF,该二聚体是一个特异性连接5端的核酸内切酶，具有损伤识别和切除5端的双重作用。研究中发现DNA损伤修复增强和ERCCI的高表达可能是导致顺铂耐药的主要原因，顺铂的细胞毒作用主要是形成Pt-DNA加合物，包括单加合物与链内交联，从而抑制DNA的复制及转录，导致DNA断裂和错误编码。若ERCC1低表达，机体核苷酸切除修复能力降低，细胞发生癌变的可能性将会增加；相反，若ERCC1过表达，则可使细胞停滞在G2/M期的DNA损伤迅速修复，从而降低肿瘤的发生。ERCC1基因多态性是ERCC1表达水平高低的主要影响因素。ERCC1基因多态性是ERCC1表达水平高低的主要影响因素。ERCC1(T354C/C8092A)多态性通过影响ERCC1基因mRNA的稳定性和翻译效率，导致不同基因型的ERCC1在肿瘤细胞中表达效率及高低不同,常见多态现象ERCC1(T354C)转变比未转变的病人更能显著降低ERCC1的表达水平，从而减弱ERCC1的活性，使ERCC1对铂类造成的DNA损伤的修复能力减弱。故携带有T碱基的患者对铂类的化疗反应更好。