[发明专利]一种拟南芥高效遗传转化的方法

权利要求书

1.一种拟南芥高效遗传转化的方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）采用Km抗性的空载体pDsRed0作为测试，所述Km抗性的空载体pDsRed0序列如SEQID NO.1所示；

（2）采用1-2 μg pDsRed0质粒转化100μL农杆菌感受态，转化后的所有菌液涂布到15cm直径的培养皿中，培养皿中含有50mg/L Km抗性和25mg/L Rif抗性的LB培养基；

（3）培养皿放置28℃生长3-4天，克隆长到2-3mm大小时，直接用涂布棒收集菌体；

（4）将收集的菌体用100mL转化液体重新悬浮，获得悬浮液，所述转化液体为含有5%蔗糖的1/2 MS培养基；

（5）转化前加入终浓度为0.02% 的Silwet-77于悬浮液中并转移菌液至烧杯中；

（6）人工气候室中土壤基质种植拟南芥至盛花期，转化之前剪掉已经长出的果荚；

（7）把拟南芥的花序放入悬浮液中充分浸泡3-5分钟进行侵染；

（8）将侵染过的拟南芥植株用保鲜膜包裹，放置黑暗处16-24小时，以保持高湿度；

（9）正常浇水，用竹签固定植物，种子成熟时停止浇水；

（10）收获的种子于37℃烘箱中干燥3-5天；

（11）通过Ds-Red荧光挑选阳性种子，种植后得到阳性转基因植株。