[发明专利]一种检测乳制品中多种晚期糖基化终末产物的方法

权利要求书

1.一种检测乳制品中多种晚期糖基化终末产物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将乳制品离心脱脂后加入同位素内标品，再加入硼酸盐缓冲液和硼氢化钠溶液，获得混合液；

(2)将混合液进行酸水解，真空离心浓缩至近干，加水复溶，过滤去除杂质，获得处理后的乳制品；

(3)向处理后的乳制品中加入AGEs以制作各种AGEs标准品，将各标准品与其对应的同位素内标品的积分色谱面积比乘以对应的同位素内标品的浓度作为各标准品浓度的函数来绘制标准曲线；

(4)将处理后的乳制品进行UPLC-MS/MS检测，得到乳制品中AGEs的峰面积，代入标准曲线计算得各AGEs的浓度。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，同位素内标品包括CML-d4、CEL-d4、GOLD-15N2、MG-H1-d3和G-H1-13C2。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，每毫升乳制品中加入10mL～15mL0.2mol/L pH 9.2的硼酸盐缓冲液和5mL～8mL 1mol/L用0.1moL/L氢氧化钠溶液配制的硼氢化钠溶液，室温条件下孵育2～4h，获得混合液。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，酸水解条件为每毫升乳制品中加入20mL～25mL 6mol/L HCl，110℃酸水解24～25h。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述同位素内标品的浓度为100ng/mL～200ng/mL。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，离心脱脂的条件为：转速4500～6000g，温度0～5℃，时间10～15min。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，真空离心浓缩条件为：真空度0～1mbar，转速200～300g，温度不高于-20℃。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，CML的标准曲线为Y＝0.01143X+0.000163，CEL的标准曲线为Y＝0.02832X-0.01327，pyrraline的标准曲线为Y＝0.13448X-0.02140，pentosidine的标准曲线为Y＝0.00876X+0.01663，MG-H1/3的标准曲线为Y＝0.00878X-0.00238，MG-H2的标准曲线为Y＝0.00519X-0.00110，argpyrimidine的标准曲线为Y＝0.05723X+0.05402，G-H1的标准曲线为Y＝0.00913X-0.00137，GOLD的标准曲线为Y＝0.01109X-0.00384，MOLD的标准曲线为Y＝0.04551X-0.00447。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，UPLC条件为：色谱柱：WatersACQUITY HSS T3 100mm×2.1mm 18μm；流动相A：含有0.1％v/v甲酸的水溶液；流动相B：乙腈；柱温：30℃；流速：0.25mL/min；进样量：5μL；采用梯度洗脱的方式洗脱样品，梯度设置为98％A：2％B、95％A：5％B、90％A：10％B、92％A：8％B、98％A：2％B。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，三重四极杆质谱条件为：离子源：电离子喷雾；扫描方式：正离子模式；检测模式：MRM；脱溶剂气温度：600℃；离子源温度：120℃；脱溶剂气流速：1000L/h；进样锥气体流速：200L/h；碰撞气体流速：0.20mL/min；毛细管电压：600V；碎裂电压：40V。