[发明专利]一种去除静注人免疫球蛋白中抗A、抗A血凝素的亲和层析用缓冲液及其用途

说明书

本发明提供了一种去除静注人免疫球蛋白中抗A、抗A血凝素的亲和层析用缓冲液及其用途，属于血液制品领域。该亲和层析用缓冲液包含平衡缓冲液，该平衡缓冲液由50～200mM的醋酸盐水溶液组成。利用发明的亲和层析用缓冲液配合本发明的制备方法，得到的静注人免疫球蛋白中抗A、抗B血凝素滴度低，纯度高，分子大小分布高。本发明的亲和层析用缓冲液和制备方法能够同时有效去除静注人免疫球蛋白中的抗A和抗B血凝素，不会引起免疫球蛋白聚集，具有良好的工业应用前景。

技术领域

本发明属于血液制品领域，具体涉及一种去除静注人免疫球蛋白中抗A、抗A血凝素的亲和层析用缓冲液及其用途。

背景技术

静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin，IVIG)是由B淋巴细胞合成、分泌的一种糖蛋白，为血液制品的主要产品之一，它通常是从健康人血浆中分离得到的。静注人免疫球蛋白中含有多种免疫球蛋白，静脉输注后能迅速提高患者血液免疫球蛋白水平，从而增强机体的抗感染(病毒、细菌和其它病原体)能力和免疫球蛋白水平，增强机体的免疫调节功能，临床上主要将其用于治疗原发性和继发性免疫球蛋白缺陷病及自身免疫性疾病。

免疫球蛋白生产工艺是由美国哈佛大学医学院Cohn教授研究开发的一种低温乙醇蛋白分离工艺，该技术通过多步调节低温乙醇法的五大要素：离子强度、pH值、温度、乙醇浓度和蛋白质含量来实现分离组分I+II+III沉淀中的组分II，再经进一步提纯得到静注人免疫球蛋白。这种传统的生产工艺采用两步法提取静注人免疫球蛋白，其最大的缺陷是生产的静注人免疫球蛋白纯度偏低，多聚体等含量偏高，容易引起输注后的不良反应。随着研究的深入，静注人免疫球蛋白的治疗范围在不断增加，如皮肤病、器官移植、肿瘤、白血病等，有的病人需要长期使用或单次大剂量输注，使用低纯度静注人免疫球蛋白的风险就会大大增加。

有研究表明，静注人免疫球蛋白中的抗A血凝素(又称抗A血型抗体)、抗B血凝素(又称抗B血型抗体)是引起大剂量输注后溶血反应的主要原因，因此对静注人免疫球蛋白中抗A、抗B血凝素的滴度控制十分重要。

文献(亲和层析法去除静注人免疫球蛋白中的血型抗体，国际生物制品学杂志，2017年2月第40卷第1期)报道了一种利用亲和层析法去除静注人免疫球蛋白中的抗A/B血型抗体的方法，该方法包括以下操作：将Glycosorb A凝胶或Glycosorb B凝胶装柱；平衡：10个柱体积(CV)的注射用水(pH＝4.2)，线速度90cm/h；上样：样品线速度90cm/h，收集流穿液；冲洗：2个CV的注射用水(pH＝4.2)；柱洗脱：0.1mol/L Gly-HC1(pH＝2.7)；柱处理：2个CV的注射用水，5个CV的0.3mol/L NaOH，2个CV的注射用水，20％乙醇保存。依据中国药典2015年版四部通则3425的“抗A、抗B血凝素”，分别对Glycosorb A或GlycosorbB亲和层析前后的IVIG制品进行检测发现，该方法利用Glycosorb A层析能使样品的抗A血型抗体效价降低2个稀释倍数，而抗B血型抗体效价不受影响；利用Glycosorb B层析能使样品的抗B血型抗体效价降低2个稀释倍数，而抗A血型抗体效价不受影响。也就是说，该方法无法同时降低静注人免疫球蛋白中的抗A、抗B血凝素效价。

因此，开发出一种能够同时有效降低静注人免疫球蛋白成品中抗A、抗B血凝素滴度的方法对制备高纯度的静注人免疫球蛋白和降低临床不良反应风险具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够同时有效去除静注人免疫球蛋白中的抗A和抗B血凝素的亲和层析用缓冲液，以及利用该亲和层析用缓冲液来制备高纯度静注人免疫球蛋白的方法。

本发明提供了一种去除静注人免疫球蛋白中的抗A血凝素和/或抗B血凝素的亲和层析用缓冲液，所述亲和层析用缓冲液包含平衡缓冲液，该平衡缓冲液由50～200mM的醋酸盐水溶液组成。

进一步地，所述亲和层析用缓冲液由以下两个组分组成：