[发明专利]一种构建高检测性能捕获文库的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种构建适用于二代测序平台的捕获文库的方法，包括以下步骤：

（1）获得片段化的DNA；

（2）将片段化的DNA与Y型接头连接，获得预文库；

（3）将预文库与杂交探针进行杂交，所述杂交探针为生物素标记的探针，然后加入链霉亲和素磁珠进行捕获，获得杂交产物；

（4）杂交产物洗脱，获得捕获文库；

其中所述步骤（4）包括：

步骤（4a）：对杂交产物进行碱变性；

步骤（4b）：孵育；

步骤（4c）：去除磁珠；和

步骤（4d）：中和；

其中所述方法不包括PCR扩增；

并且其中步骤（4a）中，在杂交产物中加入碱试剂，进行碱变性，解开探针与目的片段形成的双链；其中，加入碱试剂后的体系pH值为11-14。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述片段化的DNA选自天然存在的短片段DNA或通过人工打断基因组DNA获得的短片段DNA。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述天然存在的短片段DNA选自外周血游离DNA、肿瘤游离DNA或自然降解的基因组DNA；所述人工打断基因组DNA通过超声处理、机械打断或通过酶切实现。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述片段化的DNA源自下组的样本：血液、血清、血浆、关节液、精液、尿液、汗液、唾液、粪便、脑脊液、腹水、胸水、胆汁或胰腺液。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其中所述片段化的DNA长度为150-400bp。

6.根据权利要求1所述的方法，还包括在步骤（1）后，将获得的片段化的DNA进行末端修复和/或末端加A的步骤。

7. 根据权利要求1所述的方法，其中所述Y型接头是长Y型接头，包括扩增引物、index标签序列、read 1/read 2测序引物和index read 测序引物。

8.根据权利要求1所述的方法，其中步骤（4a）中碱变性所用的碱试剂选自下组中的一种或多种：NaOH、KOH、氢氧化锂、氢氧化钙、氢氧化镁、氨水、碳酸锂、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸氢铵、甲醇钠、甲醇钾、乙醇钠、乙醇钾、叔丁醇钠或叔丁醇钾。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述碱试剂浓度为0.05M-1M。

10.根据权利要求1所述的方法，所述步骤（4d）中，采用中和剂中和，所述中和剂选自Tris-HCl、乙酸、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液或乙酸盐缓冲液中的一种或多种。