[发明专利]一种利用LAMP技术快速检测金黄色葡萄球菌的引物组、检测方法、试剂盒及应用

权利要求书

1.一种利用LAMP技术快速检测金黄色葡萄球菌的引物组，其特征在于：引物序列如下：

spA-F3:AAGATGGCAACAAGCCTG；

spA-B3:TGTTAGCATCTGCATGGT；

spA-FIP:CCGTTTGCTTTTGCAATGTCAGCAACGGAGTACATGTCG；

spA-BIP:CACTACTGCTGACAAAATTGCTGCAACAACAAGTTCTTGACCAG。

2.一种快速检测金黄色葡萄球菌的LAMP检测试剂盒，其特征在于，包括：2×LAMP反应缓冲液、Bst 2.0Warmstart DNA聚合酶、20×Eva Green、羟基溴酚蓝、权利要求1中所述的引物组。

3.根据权利要求2所述的一种快速检测金黄色葡萄球菌的LAMP检测试剂盒，其特征在于：所述2×LAMP反应缓冲液包括：40mM Tris，20mM KCl，16mM MgSO₄，20mM(NH₄)₂SO₄，0.2％Tween-20，2.8mM dNTPs，1M甜菜碱，pH 8.8。

4.根据权利要求2所述的一种快速检测金黄色葡萄球菌的LAMP检测试剂盒，其特征在于，还包括阳性对照样品金黄色葡萄球菌ATCC12600、标准菌株ATCC 13076、标准菌株ATCC14028、标准菌株D68-4、插入了金黄色葡萄球菌spA基因的载体质粒中的至少一种。

5.根据权利要求2所述的一种快速检测金黄色葡萄球菌的LAMP检测试剂盒，其特征在于：还包括阴性对照。

6.根据权利要求2所述的一种快速检测金黄色葡萄球菌的LAMP检测试剂盒，其特征在于：外引物spA-F3和spA-B3与内引物spA-FIP和spA-BIP的浓度比例为8:1。

7.一种利用LAMP技术快速检测金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于，包括：利用权利要求2-6任一所述的LAMP检测试剂盒对样品DNA进行扩增，反应结束后样品呈天蓝色为阳性，紫罗兰色为阴性；或用琼脂糖凝胶电泳检测出现梯形条带为阳性，没有梯形条带为阴性。

8.根据权利要求7所述的一种利用LAMP技术快速检测金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于：LAMP反应体系为25μL：12.5μL的2×LAMP缓冲液，1μL的内引物spA-FIP，1μL的内引物spA-BIP，1μL外引物spA-F3，1μL外引物spA-B3，1μL染料羟基溴酚蓝，1μL的荧光染料20×Eva Green，1μL的Bst 2.0Warmstart DNA聚合酶，3.5μL无酶水，2μL DNA样品。

9.根据权利要求7所述的一种利用LAMP技术快速检测金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于：反应条件为65℃恒温45min，90℃灭活2min。

10.如权利要求1所述的引物组或权利要求2-6任一所述的检测试剂盒或权利要求8或9所述的检测方法在检测金黄色葡萄球菌中的应用。