[发明专利]枯草芽孢杆菌、红发夫酵母和根霉混合烟草发酵方法

说明书

本发明涉及一种混合烟草发酵方法，该方法将枯草芽孢杆菌、红发夫酵母分别接种于LB琼脂培养基、YPD琼脂培养基上，分别在37℃培养24h、22℃培养5‑7天，得到枯草芽孢杆菌、红发夫酵母的单菌落；将单菌落分别接种到LB液体培养基、YPD液体培养基中，并分别于37℃培养20h、22℃培养28‑29h，得到枯草芽孢杆菌、红发夫酵母种子液并将其等体积混合得到混合菌液；之后对混合菌液离心并收集菌体洗涤；洗涤后的菌体进行重悬，得到菌悬液；往烟叶中加入菌悬液和根霉粉，在25℃下发酵7‑10天。本发明中枯草芽孢杆菌、红发夫酵母和根霉复配混合能够将烟叶中淀粉、蛋白质等对烟叶品质有负面影响的大分子降解为醇类、脂类、醛类及致香小分子物质，有效改善烟叶的品质。

技术领域

本发明涉及一种枯草芽孢杆菌、红发夫酵母和根霉混合烟草发酵方法，属于微生物技术领域。

背景技术

烟叶发酵是烟叶经调制之后在自然或人工干预条件下进行的改善烟叶品质的重要方法。经过调制之后的烟叶感官品质虽有所提升，但刺激性较大、青杂气重、香气质单调、香气量不足，不能直接用来生产卷烟。而用微生物对烟叶进行发酵能显著改善上述缺陷，提高卷烟质量。同时为了满足加热不燃烧卷烟在低温下能够释放更多的香味物质，既能降低普通卷烟点燃燃烧带来的危害，又能满足消费者的抽吸感。微生物可以通过产生许多具有生物活性的酶来降解烟叶中的大分子物质，产生醇类、脂类、醛类及多种有机酸致香小分子物质，从而改善烟叶的感官品质。同时，微生物发酵还能降低烟叶中烟碱、烟草特有亚硝胺(TSNA)以及烟气中焦油等有害物质的含量，降低卷烟燃吸的危害。

发明内容

针对上述问题，本发明提出一种枯草芽孢杆菌、红发夫酵母和根霉混合烟草发酵方法，该方法包括如下步骤：

S1：将枯草芽孢杆菌接种于LB琼脂培养基上，在37℃培养24h；将红发夫酵母接种于YPD琼脂培养基上，在22℃培养5-7天，得到枯草芽孢杆菌、红发夫酵母的单菌落；

S2：将步骤S1中枯草芽孢杆菌、红发夫酵母的单菌落分别接种到LB液体培养基、YPD液体培养基中，并分别于37℃培养20h、22℃培养28-29h，分别得到枯草芽孢杆菌种子液与红发夫酵母种子液；

S3：将枯草芽孢杆菌种子液与红发夫酵母种子液等体积混合得到混合菌液；

S4：将步骤S3的混合菌液离心并收集菌体；

S5：对步骤S4收集的菌体进行洗涤；

S6：对步骤S5洗涤后的菌体进行重悬，得到菌悬液；

S7：往烟叶中加入步骤S6的菌悬液和根霉粉，在25℃下发酵7-10天。

进一步地，步骤S1中的LB琼脂培养基成分为胰蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、氯化钠10g/L、琼脂20g/L；YPD琼脂培养基成分为葡萄糖20g/L、胰蛋白胨20g/L、酵母粉10g/L、琼脂20g/L。

进一步地，步骤S2中的LB液体培养基成分为胰蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、氯化钠10g/L；所述YPD液体培养基成分为葡萄糖20g/L、胰蛋白胨20g/L、酵母粉10g/L。

进一步地，步骤S7中的烟叶在发酵前粉碎成粉末，过200目筛。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明烟叶发酵中的枯草芽孢杆菌能够产生高酶活力的蛋白酶，快速降解烟叶中的蛋白质，改善烟叶的感官品质；红发夫酵母首次应用于烟叶发酵中，能够产生多种香气物质，提高烟叶的香气质和香气量；同时枯草芽孢杆菌、红发夫酵母和根霉复配混合能够将烟叶中淀粉、蛋白质、纤维素等对烟叶品质有负面影响的大分子降解为醇类、脂类、醛类及多种有机酸致香小分子物质，改善烟叶的品质。