[发明专利]一种度鲁特韦液相色谱测定方法

说明书

本发明属于药物分析技术领域，尤其是一种度鲁特韦液相色谱测定方法，所述测定方法以USP‑L1型十八烷基键合硅胶XBridge C18作为固定相、流动相A酸性缓冲盐‑流动相B乙腈‑流动相C甲醇梯度洗脱为流动相、各峰分离度在2.0以上，理论塔板数2500以上的检测器对度鲁特韦制剂、原料药及中间体、杂质的含量进行测定；本发明中的度鲁特韦液相色谱测定方法使用二极管阵列检测器PD)，除了可以得到在指定波长246nm下的色谱图谱，包含保留时间、峰高、峰面积、面积百分比等。同时可以通过工作站软件显示峰纯度，提示色谱峰没有分离的情况，还可显示某单一峰的紫外光谱图，起到一定的鉴别作用。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种度鲁特韦液相色谱测定方法。

背景技术

艾滋病是获得性免疫缺陷综合征(Acquired Immune Deficiency Syndrome，AIDS)的音译，它源于一种名为人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)的逆转录病毒，感染后破坏人体免疫系统，使得人体极易感染多种疾病或因各种并发症而死亡。2013年经FDA批准，拉替拉韦(Raltegravir，商品名为艾生特)作为第一代整合酶抑制剂进入临床，治疗效果突出，不良反应和药物相互作用都较少。随后另外两个整合酶抑制剂药物埃替格韦(Elvitegravir)和度鲁特韦(Dolutegravir)被批准上市，后续研究表明度鲁特韦更不易产生耐药性。因此，包括美国在内的许多医疗资源丰富的发达国家推荐使用含整合酶抑制剂的治疗方案作为一线抗病毒药物。2019年7月，世卫组织建议将度鲁特韦作为艾滋病首选治疗方案。日本科学家T.Yasukata等人报道以简单的麦芽酚(maltol)为起始原料，经亲核取代、消去、氧化、酯化等等多步反应合成了最终产物。合成步骤长，意味着更多的中间体及副产物可能最终会残留在终产物中，原料药的储存过程中、制剂生产过程中难免会发生降解或与辅料的相互作用，本发明一种度鲁特韦液相色谱测定方法可以很好地适用于度鲁特韦原料药、制剂的生产过程中的监控，控制产品的质量，包括含量、含中间体在内的固有杂质、降解产物等。

发明内容

本发明的目的在于：克服现有技术中的不足，提供一种以USP-L1型十八烷基键合硅胶(XBridge C18)作为固定相、酸性缓冲盐(流动相A)-乙腈(流动相B)-甲醇(流动相C)梯度洗脱为流动相、二极管阵列检测器(PDA)的液相色谱测定方法对度鲁特韦制剂、原料药及中间体的含量、纯度、有关物质进行测定的方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种度鲁特韦液相色谱测定方法，所述测定方法以USP-L1型十八烷基键合硅胶XBridge C18作为固定相、流动相A酸性缓冲盐-流动相B乙腈-流动相C甲醇梯度洗脱为流动相、各峰分离度在2.0以上，理论塔板数2500以上的检测器对度鲁特韦制剂、原料药及中间体、杂质的含量进行测定。

进一步的，所述测定方法包括以下步骤：

1)色谱条件：所述流动相的流速为0.5-2.0mL/min，柱温为30-50℃，

2)样品溶液配制：

纯度检测时取度鲁特韦制剂、原料药、中间体或中控反应液，加稀释液配制成目标物质浓度约0.2mg/mL的溶液作为样品溶液；

含量检测时精密称取度鲁特韦成品或中间体标准品，加稀释液配制成目标物质浓度约0.05mg/mL的溶液作为标准品溶液；精密称取度鲁特韦制剂、原料药、中间体或中控反应液，加稀释液配制成目标物质浓度约0.05mg/mL的溶液作为样品溶液；

(3)进样分析

以初始条件平衡仪器，待基线平衡后，分别进样空白溶液、标准品溶液和样品溶液各20μL，记录扣除空白峰的样品溶液图谱，以校正面积归一法计算纯度或杂质含量，其中F为某杂质的响应因子，当F在0.7～1.3时按F＝1，或以外标法计算目标物质的含量，其中P为标准的含量；