[发明专利]用于检测华氏巨球蛋白血症相关基因突变的数字PCR试剂盒及引物和探针

说明书

本发明涉及生物检测领域，具体讲，涉及一种用于检测华氏巨球蛋白血症(WM)相关基因突变的数字PCR试剂盒及引物和探针。本发明的试剂盒中含有用于检测CXCR4S338X位点的突变的引物和探针。本发明试剂盒采用数字PCR技术，对人类CXCR4S338X突变位点进行定量检测，为临床医生对WM患者靶向用药的疗效监测及临床用药提供参考。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体讲，涉及一种用于检测华氏巨球蛋白血症相关基因突变的数字PCR试剂盒及引物和探针。

背景技术

华氏巨球蛋白血症(Waldenstrom macroglobulinemia，WM)是一种惰性B细胞肿瘤，1944年由瑞典学者Jan G.Waldenstrom首次报道。WHO将其定义为分泌单克隆免疫球蛋白M(immunoglobulin M，IgM)的淋巴浆细胞淋巴瘤。2012年，Treon等证实9 1％的WM患者存在MYD88^L265P基因突变。2014年，Hunter等发现CXCR4^WHIM突变在WM患者中占27％。这两个重现性体细胞突变的发现，为华氏巨球蛋白血症的诊断、治疗及预后评估揭开了新篇章。

CXCR4^WHIM突变是一种体细胞突变，该突变最早在WHIM综合征(以疣、低丙种球蛋白血症、感染、粒细胞缺乏为特征的免疫缺陷病)中发现。CXCR4^WHIM在WM中的体细胞突变是该基因首次在癌症中发现的体细胞突变，其一般为杂合突变。突变可分为无义突变(nonsense,NS)(也称为CXCR4^WHIM/NS)和移码突变(frame shift,FS)(也称为CXCR4^WHIM/FS)两类。CXCR4^WHIM突变中最为常见的是S338X点突变；S338X突变有两种类型：一种突变是CG，另一种是CA。CXCR4^WHIM突变可导致CXCR4蛋白结构C末端产生异常，使得具有调节功能的丝氨酸丢失，导致CXCR4的内化受损和激活延长。CXCR4与其配体CXCL12结合后，使得丝氨酸/苏氨酸激酶和丝裂原活化蛋白激酶信号系统异常活化；同时，CXCR4对于淋巴浆细胞的存活、跨内皮细胞迁移归巢及黏附于骨髓基质都有很大作用。CXCR4^WHIM突变率在WM患者中仅次于MYD88^L265P突变，突变比率25％-30％。而在其他B细胞淋巴瘤如B-CLL、毛细胞性白血病及浆细胞病如多发性骨髓瘤和轻链型淀粉样变中均未发现突变。

MYD88^L265P和CXCR4^WHIM突变状态对于WM患者具有一定的临床预后意义。分析显示:①MYD88^L265PCXCR4^WHIM/NS双突变患者的骨髓肿瘤负荷最重、血清IgM水平最高、起病时症状最多；②MYD88^L265PCXCR4^wT及MYD88^L265PCXCR4^WHIM/FS患者的骨髓肿瘤负荷居中；③MYD88^wTCXCR4^wT患者的骨髓肿瘤负荷最轻；④MYD88^L265PCXCR4^WHIM相对MYD88^L265PCXCR4^wT患者较少出现淋巴结肿大；⑤MYD88^wT患者的死亡风险更高，而CXCR4^WHIM突变与生存预后无关。因此，将MYD88和CXCR4两种基因突变情况相结合，可以得到更为精准的临床预后提示。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的首要发明目的在于提供一种用于检测华氏巨球蛋白血症相关基因突变的数字PCR试剂盒。

本发明的第二发明目的在于提供该试剂盒的使用方法。

本发明的第三发明目的在于提供用于检测华氏巨球蛋白血症相关基因突变的引物和探针。