[发明专利]一种高纯度橄榄苦苷的分离制备方法

权利要求书

1.一种高纯度橄榄苦苷的分离制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将油橄榄叶经水加热回流提取得到橄榄苦苷粗提物；

(2)将橄榄苦苷粗提物利用大孔吸附树脂进行分离富集得到橄榄苦苷洗脱物；

(3)将橄榄苦苷洗脱物利用高速逆流色谱分离技术进行分离纯化得到橄榄苦苷粗制品；

(4)将橄榄苦苷粗制品利用制备型液相色谱进行分离纯化得到橄榄苦苷精制品；橄榄苦苷精制品冷冻干燥后获得高纯度橄榄苦苷。

2.根据权利要求1所述的分离制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的油橄榄叶，为油橄榄(Olea europaea L.)的干燥叶，粉碎后过10目筛得到橄榄叶粗粉，橄榄叶粗粉加水进行回流提取，橄榄叶粗粉与水的重量比为1：4-7；所述的加热回流提取，指的是加热至50-60℃回流提取4-9h得到橄榄苦苷粗提物。

3.根据权利要求1所述的分离制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的将橄榄苦苷粗提物利用大孔吸附树脂进行分离富集，指的是，将橄榄苦苷粗提物上大孔吸附树脂柱吸附，吸附结束后依次用不同的洗脱液进行洗脱，收集洗脱后得到的液体经旋转蒸发去除溶剂、冷冻干燥后得到橄榄苦苷洗脱物。

4.根据权利要求3所述的分离制备方法，其特征在于，所述的依次用不同的洗脱液进行洗脱，指的是依次水、50％乙醇和95％乙醇进行洗脱，收集50％乙醇洗脱后得到的液体经旋转蒸发去除溶剂、冷冻干燥后得到橄榄苦苷洗脱物。

5.根据权利要求3所述的分离制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的大孔吸附树脂为AB-8、LSA-8、SPD-700、LSA-10、D101中的任意一种；利用大孔吸附树脂进行分离富集时的操作条件为：以橄榄苦苷粗提物与大孔吸附树脂的质量比为1：50上柱，上柱流速为1ml/min，洗脱液的上柱流速为1ml/min，洗脱液用量为1-3BV。

6.根据权利要求3所述的分离制备方法，其特征在于，所述的旋转蒸发去除溶剂，操作条件为：真空度为-0.9—-0.1mpa、温度为50-60℃，蒸发过程配设有冷却水循环系统，冷凝水的温度为-10℃以下，蒸发至产物中无乙醇味结束；所述的冷冻干燥，操作条件为：真空度为2-8mp、温度-25—-10℃、时间5-10min。

7.根据权利要求1所述的分离制备方法，其特征在于，步骤(3)中，将橄榄苦苷洗脱物利用高速逆流色谱分离技术进行分离纯化，操作条件为：溶剂系统为正丁醇、乙酸乙酯、甲醇、水、氯仿以1：17：1：21：0.3重量比混合后的混合物，溶剂系统静置分层后分别取上相和下相各20ml且分别加入橄榄苦苷洗脱物30mg，上相作为固定相、下相作为流动相，在转速950r/min、流动相体积流量1.5m L/min、进样浓度20mg/m L条件下进行分离，分离时间为200-280min，分离得到的产物经旋转蒸发去除溶剂后得到橄榄苦苷粗制品。

8.根据权利要求7所述的分离制备方法，其特征在于，所述的旋转蒸发去除溶剂，操作条件为：真空度为-0.9—-0.1mpa、温度为50-60℃，蒸发过程配设有冷却水循环系统，冷凝水的温度为-10℃以下，蒸发至产物中无乙醇味结束。

9.根据权利要求1所述的分离制备方法，其特征在于，步骤(4)中，将橄榄苦苷粗制品利用制备型液相色谱进行分离纯化，采用的色谱柱为C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为体积比为75:25的水：乙腈，流速为1ml/min，柱温为30℃，检测波长232nm，进样体积为5ml，运行25min筹集产物经旋转蒸发去除溶剂、冷冻干燥得到高纯度橄榄苦苷。

10.根据权利要求9所述的分离制备方法，其特征在于，所述的旋转蒸发去除溶剂，操作条件为：真空度为-0.9—-0.1mpa、温度为50-60℃，蒸发过程配设有冷却水循环系统，冷凝水的温度为-10℃以下，取蒸发得到的部分溶剂加入酸性重铬酸钾溶液，如果变成灰绿色则说明没有蒸完，如果不变色则证明蒸发完毕；所述的冷冻干燥，操作条件为：真空度为2-8mp、温度-25—-10℃、时间5-10min。