[发明专利]一种热稳定性增强的H7N9禽流感病毒HA蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种热稳定性增强的H7N9禽流感病毒HA蛋白，所述热稳定性增强的H7N9禽流感病毒HA蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。相比较野生型HA蛋白，本发明的H7N9禽流感病毒HA蛋白具有更强的热稳定性和免疫原性。本发明的H7N9禽流感病毒HA蛋白与SEPPIC MONTANIDE^TMISA 71 VG配合免疫SPF鸡后，相比较野生型HA蛋白，可刺激机体更快地产生更高水平的HI抗体，并提供针对异源H7N9禽流感病毒致死性攻击的完全临床保护，同时减少攻毒后鸡群的排毒量。

技术领域

本发明涉及一种热稳定性增强的H7N9禽流感病毒HA蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

禽流感(Avian Influenza,AI)是由禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)引起的绝大多数野生禽类和家禽都可感染的一种急性传染病，对我国养禽业构成了严重威胁。疫苗免疫是目前防控禽流感最主要的措施。现阶段，我国防控H7N9禽流感仍然依赖传统的胚毒灭活疫苗，但此类疫苗存在一定弊端，诸如生产周期容易受到鸡胚供应不足影响，生产过程存在操作活毒引起的生物安全风险以及人工成本高昂等等。因此，为了弥补传统灭活疫苗的不足之处，亟需研发改进的新型禽流感疫苗。亚单位疫苗作为新型基因工程疫苗的一种，经多项研究证实，能为机体提供有效的免疫保护。亚单位疫苗的特点在于不含病毒核酸而无感染性，且其生产过程不涉及鸡胚繁殖，既规避了散播病毒的生物安全问题，相比传统的灭活疫苗也极大地缩短了生产周期。

流感病毒表面的血凝素(Hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)是两种主要的病毒囊膜糖蛋白，当前研发禽流感亚单位疫苗选用最广泛的抗原是血凝素HA，其以三聚体的形式存在于病毒囊膜表面，结构由变异性较高的球状头部结构域和较为保守的茎部结构域组成。然而，禽流感亚单位疫苗所诱导的免疫应答强度还有进一步提升的空间，这仍然是当前禽流感亚单位疫苗研发寻求突破的重要目标。

对于以抗原蛋白为主要组成成分的亚单位疫苗而言，抗原蛋白的稳定性是至关重要的因素之一。一方面，增强抗原蛋白的稳定性可减缓抗原蛋白的降解；另一方面，增强抗原蛋白的稳定性可进一步提升抗原蛋白的免疫原性。国外研究团队通过融合外源序列实现HA蛋白的三聚化或者寡聚化，增强了HA蛋白的结构稳定性，进而在免疫动物体内表现出增强的免疫原性。此外，国内学者发现A型流感H3N2 HA蛋白跨膜区两个半胱氨酸突变后会对HA蛋白的热稳定性和融合活性产生影响，进一步将H3N2 HA蛋白跨膜结构域引入其他亚型(如H1、H5、 H7和H9)的流感HA蛋白后，可为小鼠和鸡提供增强的异源保护。这些研究充分说明了增强免疫原的稳定性从而进一步提高免疫原性是可行的。

针对当前禽流感疫苗存在的问题，研制一种改进的禽流感亚单位疫苗是目前市场急需的。有鉴于此，特在此提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种热稳定性增强的H7N9禽流感病毒HA蛋白；另一目的在于提供上述热稳定性增强的H7N9禽流感病毒HA蛋白的制备方法；再一目的在于提供上述热稳定性增强的H7N9禽流感病毒HA蛋白的应用。

为实现上述目的，所采取的技术方案：一种热稳定性增强的H7N9禽流感病毒HA蛋白，所述热稳定性增强的H7N9禽流感病毒HA蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

优选地，编码上述所述热稳定性增强的H7N9禽流感病毒HA蛋白的基因的核苷酸序列如 SEQ ID NO:1所示。

本发明提供了一种禽流感亚单位疫苗，包括上述所述的热稳定性增强的H7N9禽流感病毒 HA蛋白。

优选地，所述禽流感亚单位疫苗还包含佐剂。