[发明专利]一种固定长度重组多核苷酸/多脱氧核糖核苷酸制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种固定长度重组多核苷酸/多脱氧核糖核苷酸制备方法及其应用，先建立PN/PDRN的DNA文库，自文库中选取出固定长度的PN/PDRN并进行连接产生多拷贝PN/PDRN片断，将多拷贝PN/PDRN片断转接到克隆载体取得重组PN/PDRN克隆载体；将重组PN/PDRN载体引入适合细菌宿主取得转化子，培养转化子使重组PN/PDRN克隆载体得以大量复制扩增，然后再从转化子内分离出重组PN/PDRN克隆载体，自重组PN/PDRN克隆载体中酶切取得固定长度的重组PN/PDRN片段。有别于传统自人类或动物细胞组织中提取PN/PDRN的方法，本方法制备所得固定长度的重组PN/PDRN，使生产效率大幅提高，不仅能避免使用人类或动物细胞组织材料的风险，也有高产量、低成本优势，可以运用于化妆品、保健品、医疗器械与医药品等用途，经济效益获得显着提升。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种固定长度重组多核苷酸/多脱氧核糖核苷酸制备方法及其应用。

背景技术

众所周知脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid,DNA)是包含人类在内多数生物体的遗传物质，负责生命遗传讯息的维持与传递；DNA是由四种脱氧核糖核苷酸所组成的大分子聚合物，脱氧核糖核苷酸是由脱氧核糖、碱基和磷酸所构成。脱氧核糖核苷酸有4种：腺嘌呤脱氧核糖核苷酸(Adenine deoxyribonucleotide,A)、鸟嘌呤脱氧核糖核苷酸(Guanine deoxyribonucleotide,G)、胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸(Thyminedeoxyribonucleotide,T)和胞嘧啶脱氧核糖核苷酸(Cytosine deoxyribonucleotide,C)。DNA分子结构则由两股反向互补的多脱氧核糖核苷酸链，A-T、G-C间以氢键形成碱基配对(base pair,bp)，形成稳定的双股螺旋结构。

多核苷酸(Polynucleotides,PN)或多脱氧核糖核苷酸(Polydeoxyribonucleotides,PDRN)是从大分子DNA降解后取得的小片段产物，长度介于数十到数千碱基对，功能性PN/PDRN的长度介于50到2000碱基对；目前已知PN/PDRN的长度决定其生物功能性，对序列则没有特定要求。

以往研究显示PN/PDRN具有许多的生物活性，包括：促进细胞生长、提高细胞活性、促进DNA修复、抗发炎、抗氧化、促进血管生成、促进胶原蛋白合成、促进多种组织修复再生、促进伤口愈合、减少疤痕生成、减少皱纹、增加皮肤与弹性、减小毛孔粗大、抑制黑色素生成等功效。PN/PDRN目前已运用于多种医药品、医疗器械、美容产品中，例如再生类药物、关节腔填补剂、皮下植入剂、水光类美容产品、涂抹类美容产品。

既有PN/PDRN主要提取自人类或哺乳类动物的胎盘组织、大西洋鲑鱼的精细胞/精囊组织、虹鳟鱼的精细胞/精囊组织、太平洋鲑鱼的精细胞/精囊组织、中华鲟的精细胞/精囊组织。现有关于PN/PDRN的制备专利主要集中在如何从鱼类的精液和/或精囊中提取出多核苷酸/多脱氧核糖核苷酸片段，包括：CN107287186A从鱼类的精液分离多脱氧核糖核苷酸的方法、CN110747194A一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸及其制备与应用、CN112315836A一种高效的外用PDRN的制备方法及其应用。

发明人在实际使用过程中发现，这些现有技术至少存在以下技术问题：

1、现有制备方式的原料供应有限制：鱼类有一定的养殖周期，甚至要捕捞某些野生鱼种还有季节性问题，因此，现有技术制作PN/PDRN所需原料(raw material)的取得容易受到限制；

2、现有制备方式的PN/PDRN使用上有限制：人类或动物来源的材料在运用上常因病毒传播和不纯物的免疫原性等方面的安全风险问题而受到较严格的要求，因此，人类或动物来源PN/PDRN运用于在高侵入性医疗产品或医药品时易受限制，需要投入更多安全性验证；