[发明专利]一种化学合成生长抑素中产生副产物的检测方法

说明书

本发明提供了一种化学合成生长抑素中产生副产物的检测方法，属于小分子检测技术领域。为了提供一种针对半胱氨基酸消旋杂质、甘氨酸和丙氨酸错接肽和缺失肽杂质的检测方法。本发明利用水溶解生长抑素作为检测样本，将检测样品生长抑素稀释50‑100倍后作为对照样品，以硫酸铵缓冲液作为作为流动相A，以甲醇为流动相B，获得检测样品色谱图和对照样品的色谱图，获得副产物的含量。本发明能准确检测出生长抑素中半胱氨酸消旋杂质、甘氨酸和丙氨酸的错接肽和缺失肽杂质的含量，可以有效控制产品中有关物质的含量，填补了现有检测方法对消旋、缺失和错接肽杂质无法检测的不足。

技术领域

本发明属于小分子检测技术领域，具体涉及一种化学合成生长抑素中产生副产物的检测方法。

背景技术

生长抑素化学名为L-丙氨酰-L-甘氨酰-c[L-半胱氨酰-L-赖氨酰-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-色氨酰-L-赖氨酰-L-苏氨酰-L-苯丙氨酰-L-苏氨酰-L-丝氨酰-L-半胱氨酸]，与抑制人生长激素释放的下丘脑激素结构相同，为白色或类白色粉末，分子式为C₇₆H₁₀₄N₁₈O₁₉S₂，分子量为1637.89。主要活性成分为生长抑素，为化学合成的由十四个氨基酸组成的环状多肽。

生长抑素的药理作用为：①明显降低肝硬化门脉高压病人门静脉压力和食道曲张静脉压力，对周围血管阻力、肝血管阻力、心排出量和心率、体循环压力等无明显影响。②抑制胃酸及胃蛋白酶分泌，促进胃粘液分泌，抑制胃肠道蠕动，减少胰液、胆汁分泌，而减少胰液、胆汁返流造成的胃粘膜进一步损害。③抑制胃肠动力，减少胃肠道运动而减少机械刺激造成进一步出血。④减少胃肠道血流量及维持细胞膜稳定性，降低内毒素对胃粘膜组织的影响，保护未受损的粘膜及促进粘液再生。

生长抑素的有关物质通常由起始物料中引入的杂质，化学合成反应的副产物及存储过程中的降解物组成。这些有关物质会降低分子状态生长抑素的占比，从而不仅会降低药效，还会增大药物的副作用，给患者带来安全隐患。因此对生长抑素中有关物质的检测及控制成为药物制备过程不可忽视的方面。

生长抑素是由保护氨基酸经固相合成制备所得的肽类化合物，其起始物料Fmoc-Cys(Trt)-OH含有消旋杂质，合成过程中可产生半胱氨酸消旋的杂质肽；生长抑素肽序中含有的甘氨酸和丙氨酸，合成过程中易形成错接肽和缺失肽。

现有技术中中国药典(2020版)、USP、BP、EP均收录了生长抑素有关物质检测方法，其中中国药典(2020版)、USP、BP检测方法相同。但各国药典方法均对半胱氨酸消旋肽杂质、甘氨酸和丙氨酸的错接肽和缺失肽杂质无检测能力，现有技术各方法检测时上述杂质均与生长抑素峰重合。

发明内容

本发明的目的是为了提供一种针对半胱氨基酸消旋杂质、甘氨酸和丙氨酸错接肽和缺失肽杂质的检测方法。

本发明提供了一种化学合成生长抑素中产生副产物的检测方法，所述方法是利用水溶解生长抑素作为检测样本，将检测样品生长抑素稀释50-100倍后作为对照样品，以硫酸铵缓冲液作为作为流动相A，以甲醇为流动相B，获得检测样品色谱图和对照样品的色谱图，获得副产物的含量。

进一步地限定，所述副产物为缺失肽、半胱氨酸消旋杂质和错接肽。

进一步地限定，所述缺失肽为[des-Ala¹]生长抑素、[des-Gly²]生长抑素和[des-Thr¹⁰]生长抑素。

进一步地限定，所述半胱氨酸消旋杂质为[D-Cys³]生长抑素。

进一步地限定，所述错接肽为[des+Ala¹]生长抑素和[des+Gly²]生长抑素。