[发明专利]生产己二胺的重组质粒及其应用在审
| 申请号： | 202111014720.X | 申请日： | 2021-08-31 |
| 公开（公告）号： | CN113755419A | 公开（公告）日： | 2021-12-07 |
| 发明（设计）人： | 王丹;罗若诗;周丹;王永忠 | 申请（专利权）人： | 重庆大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12P13/00;C12N15/54;C12N15/53;C12N15/60 |
| 代理公司： | 北京元本知识产权代理事务所(普通合伙) 11308 | 代理人： | 黎昌莉 |
| 地址： | 400044 *** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 生产 己二胺 重组 质粒 及其 应用 | ||
1.一种能辅助生产己二胺工程菌的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒为pRLABCD重组质粒，所述重组质粒包括raip基因、leuA基因、leuB基因，leuC基因和leuD基因。
2.如权利要求1所述的重组质粒，其特征在于，所述pRLABCD重组质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。
3.制备权利要求2所述的重组质粒的方法，其特征在于，所述设计引物为：
raip-F:cggaattcgatggagcacctggcagact，
raip-R:caactgcagttacagttcgtccttggtatgctcg，
leuABCD-F:cgagactccatatgagccagcaagtcattattttcg，
leuABCD-R:ccgctcgagttaattcataaacgcaggttg。
4.一种生产己二胺工程菌的重组质粒组合物，其特征在于，所述重组质粒组合物由权利要求2所述的pRLABCD重组质粒和pKV重组质粒组成，所述pKV重组质粒包括kivD基因和vfl基因。
5.根据权利要求4所述的重组质粒组合物，其特征在于，所述PKV重组质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示。
6.权利要求5所述重组质粒组合物制备得到的能产生己二胺的基因工程菌LRKV。
7.一种生产己二胺工程菌的重组质粒组合物，其特征在于，所述重组质粒组合物由权利要求2所述的pRLABCD重组质粒和pAD重组质粒组成，所述pAD重组质粒包括kdcA基因和dat基因。
8.根据权利要求7所述的重组质粒组合物，其特征在于，所述PAD重组质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO：8所示。
9.一种利用权利要求8所述的重组质粒组合物制备己二胺的方法，其特征在于，具体步骤包括：
(1)将所述重组质粒组合物转入大肠杆菌BL21中得到基因工程菌LRAD；
(2)将赖氨酸作为发酵底物与所述基因工程菌LRAD培养，得到己二胺。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述赖氨酸含量为5g/L-100g/L。
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