[发明专利]一种无支架牙周膜干细胞球及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种无支架牙周膜干细胞球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)制备细胞球培养板：配置琼脂糖溶液加入到二维细胞培养六孔板的孔中，将模具放置在六孔板的琼脂糖溶液内，待琼脂糖溶液凝固后拔出模具，使得琼脂糖凝胶中形成井孔，即得到细胞球培养板；

(2)井孔润洗：用PBS润洗细胞球培养板的每个井孔；

(3)牙周膜干细胞接种：将牙周膜干细胞细胞悬液加入细胞球培养板的井孔中，井孔中加入培养液，然后将细胞球培养板放入细胞培养箱中；

(4)无支架牙周膜干细胞球培养：培养1天后，更换培养液，以后每隔2天换一次培养液；

(5)利用显微镜观察其生长状况，待形成无支架牙周膜干细胞球后进行收集。

2.根据权利要求1所述的一种无支架牙周膜干细胞球的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，配置琼脂糖溶液并加热，待琼脂糖溶液为液体状态时将模具沿着一侧孔边缘向另一侧边缘缓缓放入；待琼脂糖溶液凝固成形后，垂直拔出模具。

3.根据权利要求1所述的一种无支架牙周膜干细胞球的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述琼脂糖溶液中琼脂糖与去离子水的质量比为1：100。

4.根据权利要求1所述的一种无支架牙周膜干细胞球的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，制备细胞球培养板的过程保证无菌；制备得到的细胞球培养板井孔保持深度一致。

5.根据权利要求1所述的一种无支架牙周膜干细胞球的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，在接种细胞之前，在细胞球培养板每井孔中加入至少1mlPBS溶液进行润洗。

6.根据权利要求1所述的一种无支架牙周膜干细胞球的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，每井孔接种牙周膜干细胞1.0×10³个～1.5×10³个。

7.根据权利要求1所述的一种无支架牙周膜干细胞球的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述更换培养液的方式为半换液方式及沿培养板侧壁吸取培养液。

8.根据权利要求1所述的一种无支架牙周膜干细胞球的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，无支架牙周膜干细胞球收集过程中，用枪头吸取PBS液体进行吹吸，将含有细胞球的PBS液体放入离心管中，静置一段时间后，弃上清得到细胞球；或者通过小于细胞球直径的细胞筛收集无支架牙周膜干细胞球。

9.一种无支架牙周膜干细胞球，其特征在于，所述无支架牙周膜干细胞球通过权利要求1-8任一所述方法制备得到。

10.一种如权利要求9所述的无支架牙周膜干细胞球的应用，其特征在于，所述无支架牙周膜干细胞球应用于组织工程领域。