[发明专利]一种基于2-氨基嘌呤和酶切放大技术检测铅离子的方法

权利要求书

1.一种基于2-氨基嘌呤和酶切放大技术检测铅离子的方法，其特征在于，包括修饰了2-氨基嘌呤的DNA序列和核酸外切酶，DNA中的部分序列可与目标物特异性结合，作为荧光基团的2-氨基嘌呤能够将DNA识别目标物及核酸外切酶酶切DNA所产生的变化转换为易观察的荧光信号。

2.如权利要求1所述的一种基于2-氨基嘌呤和酶切放大技术检测铅离子的方法，其特征在于，本发明使用的这条DNA链包括Pb²⁺的特异性适配体、2-氨基嘌呤以及在适配体的3’端延长的9个碱基序列；

所述DNA序列如SEQ No.1所示。

3.如权利要求1所述的一种基于2-氨基嘌呤和酶切放大技术检测铅离子的方法，其特征在于，核酸外切酶为Exo I。

4.如权利要求1-3所述的一种基于2-氨基嘌呤和酶切放大技术检测铅离子的方法，其特征在于，用于检测铅离子的荧光分析。

5.如权利3所述的一种基于2-氨基嘌呤和酶切放大技术检测铅离子的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)制备Exo I的10x反应缓冲液：670mM甘氨酸-KOH，pH 9.5，25℃，67mM MnCl₂，10mMDTT；

(2)绘制标准曲线：在多个1.5mL离心管中分别加入25μL不同浓度的Pb²⁺标准溶液、25μL核酸链DNA,1μM混匀，混合后的溶液静置在90℃恒温金属浴中加热10min，使DNA解旋，然后在25℃金属浴条件下缓慢降至室温，继续静置反应15min，使解旋后的DNA与Pb²⁺结合形成3’端携9个碱基序列的G-四链体结构；随后加入7μL 10x反应缓冲液和2μL浓度为1U/μL的ExoI，再加11μL超纯水将体系补齐至70μL，在37℃金属浴中静置反应35min，最后用超纯水将体系补齐至500μL进行荧光测量；以铅离子浓度作为横坐标，铅离子引起的体系荧光强度回升值F₂-F₁作为纵坐标，建立了该检测方法的标准曲线，其中F₂、F₁分别表示体系中有无Pb²⁺时的荧光强度值。

6.如权利要求4所述的一种基于2-氨基嘌呤和酶切放大技术检测铅离子的方法，其特征在于，标准曲线检测步骤使用激发波长为310nm进行荧光检测，最佳发射波长位于370nm处。

7.如权利要求4所述的一种基于2-氨基嘌呤和酶切放大技术检测铅离子的方法，其特征在于，标准曲线检测步骤荧光发射光谱的扫描范围设置在350-450nm之间。