[发明专利]一种组织干细胞的获得、功能和调控方法

权利要求书

1.一种组织干细胞的获得、功能和调控方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1：组织干细胞获取和培养；

步骤2：组织干细胞分组诱导分化；

步骤3：分化细胞多组移植；

步骤4：根据对比结果得出结论。

2.根据权利要求1所述的一种组织干细胞的获得、功能和调控方法，其特征在于：所述步骤1包括以下步骤：

步骤1.1：取50d左右小白鼠，颈椎脱臼处死，剃除背毛约10～20cm²大小，剪下背皮，浸入D-PBS洗3～4次，小心去除皮肤基底的筋膜和脂肪，将皮肤放入盛有12mLCnT-57培养基的离心管中，12mL溶液中还包括3mg mL+性蛋白酶、5x抗菌素/抗真菌素，4℃孵育15h左右；

步骤1.2：将皮肤转至含有2mL CnT-57培养基的培养皿(不贴壁培养皿)中,洗去多余的中性蛋白酶，用镊子分离真皮(粉红色、不透明、胶状)和表皮(白色、半透明)，将500uL胰酶滴入一个新的培养(不贴壁培养皿)中,将表皮基底层朝下覆盖到胰酶液滴上，尽量避免组织破裂，室温孵育20～30min(盖上皿盖以防止蒸发)，直至溶液开始混浊，加入2mL CnT-57培养基(稀释剩余胰酶)，将液体吸入15mL离心管中,用1～2mL培养基将单细胞冲洗到平皿的底部,转移至离心管中；加入2mL培养基后继续摩擦,再吸入离心管，160r/min、室温离心5min，弃上清，补充培养液，并放置在培养皿中进行培养。

3.根据权利要求1所述的一种组织干细胞的获得、功能和调控方法，其特征在于：所述步骤2包括以下步骤：

步骤2.1：将组织干细胞分为A组和B组；

步骤2.2：油红O对组织干细胞进行染色标记；

步骤2.3：在相同件下进行对A组和B组进行诱导分化；

步骤2.4：观察统计组织干细胞分化程度；

步骤2.5：分化一定程度后进行复染。

4.根据权利要求1所述的一种组织干细胞的获得、功能和调控方法，其特征在于：所述步骤3包括以下步骤：

步骤3.1：分别取成年小白鼠C和幼年小白鼠D；

步骤3.2：将小白鼠C和小白鼠D进行麻醉，并且割除10～20cm²大小的背皮；

步骤3.3：分别将A组和B组分化的组织细胞移植到小白鼠C和小白鼠D体外；

步骤3.4：24h后观察A组和B组的组织细胞分化情况。

5.根据权利要求1所述的一种组织干细胞的获得、功能和调控方法，其特征在于：所述步骤4包括以下步骤：

步骤4.1：根据A组的染色深浅，以A组的组织发育程度为1，确定对比标准；

步骤4.2：根据B组的染色深浅，观察A组的组织发育程度x,并且与A组的对比标准1进行对比；

步骤4.3：记录对比结果。

6.根据权利要求3所述的一种组织干细胞的获得、功能和调控方法，其特征在于：所述步骤2.1包括以下步骤：

步骤2.1.1：通过血球计数板对组织干细胞进行计数；

步骤2.1.2：根据计数结果将组织干细胞基本平均分为A组和B组。

7.根据权利要求1所述的一种组织干细胞的获得、功能和调控方法，其特征在于：所述步骤2.5中A组和B组复染后颜色基本保持一致。