[发明专利]一种适配体DNA-荧光探针传感器及其制备方法和利用其定量检测GTX1/4的方法

说明书

本发明公开了一种用于GTX1/4检测的适配体DNA‑荧光探针传感器及其制备方法和利用其定量检测GTX1/4的方法；所述制备方法包括以下步骤：首先制备双链S1‑Spc溶液；将HKUST‑1以甲醇蒸汽熏蒸7h，得到HK‑7；将双链S1‑Spc溶液与HK‑7的分散液混合后稀释，进行震荡培养；向上述溶液中加入DNA S2溶液，震荡培养得到装载有S1‑Spc双链与S2单链的HK‑7溶液，即为用于GTX1/4检测的适配体DNA‑荧光探针传感器；根据本发明的方法构建的适配体DNA‑荧光探针传感器，仅利用适配体DNA与荧光探针的识别作用即可实现对于GTX1/4的定量检测，其操作简单，灵敏度高。

技术领域

本发明属于环境检测技术领域，具体涉及一种适配体DNA-荧光探针传感器及其制备方法和利用其定量检测GTX1/4的方法。

背景技术

膝沟藻毒素1/4(GTX1/4)是麻痹性贝类毒素中最具代表性的神经毒素，因该类毒素导致的消费者中毒死亡事件在我国沿海地区具有广布性和高发性。近年来，对GTX1/4的定量检测收到越来越多人的关注。

GTX1/4所属的麻痹性贝类毒素是全球三大海洋生物危害之一。人们误食了含有此类毒素的食物会造成因钠离子通道活性降低而导致的神经传导衰弱。中毒严重者会因其强烈的毒性迅速死亡。

对GTX1/4定量检测的研究，目前的研究方法主要局限在等速电泳法、毛细管电泳法、液相色谱以及酶链免疫吸附实验(ELISA)等。但是，这些等量检测 GTX1/4的方法，其精细的操作步骤对于实验人员的操作技巧要求较高，难以普及，这样限制了对GTX1/4定量检测的推广和普及。

因此，有关GTX1/4的定量检测已经成为食品环境检测的研究热点，能够实现对GTX1/4的操作简便、灵敏度高的定量检测是当下需要解决的问题。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种用于GTX1/4检测的适配体DNA- 荧光探针传感器及其制备方法和利用其定量检测GTX1/4的方法。根据本发明的方法构建的适配体DNA-荧光探针传感器，仅利用适配体DNA与荧光探针的识别作用即可实现对于GTX1/4的定量检测，其操作简单，灵敏度高。

本发明采取的技术方案为：

一种用于GTX1/4检测的适配体DNA-荧光探针传感器的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

(1)将等体积等浓度的DNA S1溶液、DNA Spc溶液混合后稀释，进行加热反应，冷却后得到双链S1-Spc溶液，所述DNA S1、DNA Spc的基因序列分别为：

DNA S1:3’-CCTTAATGGATTGGAGTTCCTC-5’-6-FAM；DNA S1上带有荧光基团；

DNA Spc:Dabcyl-3’-GAGGATTTCCAATCC-5’；DNA Spc上带有淬灭基团，且DNA S1与DNA Spc的基因序列可部分配对；

(2)将金属框架化合物HKUST-1以甲醇蒸汽熏蒸7h，得到HK-7；

(3)将双链S1-Spc溶液与HK-7的分散液混合后稀释，进行震荡培养；

(4)向步骤(3)得到的溶液中加入DNA S2溶液，震荡培养得到装载有 S1-Spc双链与S2单链的HK-7溶液，即为用于GTX1/4检测的适配体DNA-荧光探针传感器S1-Spc/S2/HK-7；

所述DNA S2的基因序列为：3’-GAGGAACTCCAATCC-5’；DNA S2的基因序列与DNASpc的基因序列大部分重合。