[发明专利]一种动物源性食品中万古霉素的检测方法

说明书

本发明公开了一种动物源性食品中万古霉素的检测方法，包括以下步骤：步骤一、将待测动物源性食品样品与含有卤代乙酸的提取液混合均匀，然后超声提取，离心过滤，得到的上清液；步骤二、将得到的上清液通过已经活化的阳离子固相萃取小柱进行富集；采用甲酸水溶液和甲醇依次淋洗阳离子固相萃取小柱，去除杂质，接着用氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，氮吹干，用定容液定容后，过滤，得到净化液；步骤三、采用液相色谱‑质谱串联系统对制得的净化液进行检测。本发明的优点在于：简便高效，精密度高，适用范围广。

技术领域

本发明涉及万古霉素检测技术领域，具体地说是一种动物源性食品中万古霉素的检测方法。

背景技术

万古霉素(Vancomycin)是一种抗革兰氏阳性菌的三环糖肽类抗生素，其药力较强，在临床上通常被用作其它抗菌药物治疗失败后才使用的最后手段。但万古霉素有耳毒性和肾毒性，还可引皮肤过敏反应，神经系统毒性和器官功能紊乱。人如果长期食用含有万古霉素残留的食品，不仅会危及人体健康，而且会增加细菌产生抗药性的风险，危害公共健康。

2019年，中华人民共和国农业农村部公告第250号明确规定万古霉素为禁用兽药。目前，已经发展了多种动物源性食品中万古霉素的样品预处理方法，对食品中的万古霉素进行分析(Chemical Analysis and Meterage,2013,4,30-32；Journal of InstrumentalAnalysis,2013,2,162-167；粮食与油脂,2018,2,8-10)。但是，现有方法或采用甲酸溶液体系提取，或采用磷酸盐缓冲溶液体系提取，容易受基质干扰，并且适用的基质范围有限，不同基质缺乏统一的样品预处理方法，这会给万古霉素的检测造成很大麻烦，因此其需要进一步改进。

发明内容

本发明之目的是弥补上述之不足，向社会公开简便高效、精密度高、适用范围广的一种动物源性食品中万古霉素的检测方法。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种动物源性食品中万古霉素的检测方法，包括以下步骤：

步骤一、将待测动物源性食品样品与含有卤代乙酸的提取液混合均匀，然后超声提取，离心过滤，得到的上清液；

步骤二、将得到的上清液通过已经活化的阳离子固相萃取小柱进行富集；采用甲酸水溶液和甲醇依次淋洗阳离子固相萃取小柱，去除杂质，接着用氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，氮吹干，用定容液定容后，过滤，得到净化液；

步骤三、采用液相色谱-质谱串联系统对制得的净化液进行检测。

进一步优化本技术方案的措施是：

作为改进，所述的提取液中，卤代乙酸水溶液和乙腈的体积比为4-20：1，卤代乙酸水溶液的质量浓度为0.002-0.06。

作为改进，所述的步骤一中，超声提取的条件为超声频率60Hz-120Hz，提取10min-30min。

作为改进，所述的卤代乙酸为一氟乙酸、二氟乙酸、三氟乙酸、一氯乙酸、二氯乙酸、三氯乙酸、一溴乙酸、二溴乙酸、三溴乙酸、一碘乙酸、二碘乙酸、三碘乙酸中的一种或几种的混合。

作为改进，所述的步骤二中，阳离子固相萃取小柱的活化方法为：依次用3mL甲醇和3mL水活化阳离子固相萃取小柱。

作为改进，所述的步骤二中，淋洗用的甲酸水溶液，甲酸与水的体积比为0.05％-3％：1。

作为改进，所述的步骤二中，洗脱用的氨水甲醇溶液，氨水与甲醇的体积比为1％-8％：1。

作为改进，所述的定容液为甲醇、水、甲酸按照体积比10:90:0.1混合的溶液。