[发明专利]一种牙鲆肽聚糖识别蛋白的重组蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种牙鲆肽聚糖识别蛋白的重组蛋白及其制备方法和应用。所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，核酸序列如SEQIDNO.2所示。本申请经PCR扩增PoPGRP原核表达片段，再将其构建到质粒BluntE1上，后导入表达感受态BL21pLysS中进行诱导表达与纯化复性蛋白，从而得到具有活性的牙鲆PGRP重组蛋白。构建得到的牙鲆肽聚糖识别蛋白的重组蛋白可以与革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌发生凝集，同时也具有一定的杀菌作用。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，特别涉及一种牙鲆肽聚糖识别蛋白的重组蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

肽聚糖识别蛋白(PGRP)是一种重要的天然免疫识别受体，在机体的免疫防御机制中扮演着重要角色。目前PGRPs大致可以分为短型PGRP(PGRP-S)、中间型的PGRP(PGRP-I)、长型PGRP(PGRP-L)三类。PGRP-S最短，PGRP-L最长，PGRP-I的大小居于二者之间。PGRP在生物机体免疫相关的细胞、组织、器官中都有表达。如昆虫的PGRP-S在淋巴、表皮、脂肪体细胞、血细胞、内脏等多处都有分布，PGRP-L主要分布在血细胞中。哺乳动物中，表达量最多的为PGRP-S，在中性粒细胞的颗粒中广泛存在，其次为PGRP-L，主要存在于肝脏中，表达量最低的为PGRP-I，主要在皮肤、食道等都有分布。硬骨鱼中，PGRP-S在鱼鳃中表达较多，PGRP-L在鱼肠具有较高表达。

牙鲆(Paralichthys olivaceus)又称比目鱼，体型扁平呈卵圆形，两眼位于头部的左侧，尾柄较长，牙齿尖锐，呈锥形状。牙鲆属于冷温性底栖鱼类，成鱼最适生长的温度为14℃到23℃。牙鲆为广盐性鱼类，可在盐度低于8‰的条件下生活，其次对低溶氧的难受力较强。幼鱼及成鱼多捕食鱼类、头足类与甲壳类，其产卵期约在4-6月。牙鲆为名贵海产鱼类，同时又是重要的海水增养殖鱼类之一，是较有前途的养殖品种。目前PGRP在草鱼、黄花鱼、鲤鱼、虹鳟鱼、许氏平鮋、斑点叉尾鮰、斑马鱼等硬骨鱼都有一定的研究。牙鲆作为经济价值较高的鱼类，生存也面对着考验，由于环境的污染及人类对抗生素的大量滥用，使得细菌对抗生素的耐药性大大增加，这严重的危机到了牙鲆的生存，也威胁到了人类的身体健康。研究牙鲆PGRP对其生存生长具有重大意义，同时也可以改善滥用抗生素的状况，带给养殖户更高的效益。

发明内容

本发明为了解决上述技术问题，提供了一种牙鲆肽聚糖识别蛋白的重组蛋白及其制备方法和应用。

第一方面，本申请提供一种牙鲆肽聚糖识别蛋白的重组蛋白，是通过以下技术方案得以实现的。

一种牙鲆肽聚糖识别蛋白的重组蛋白，所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。

第二方面，本申请提供一种编码上述牙鲆肽聚糖识别蛋白的重组蛋白的核酸，是通过以下技术方案得以实现的。

一种编码上述牙鲆肽聚糖识别蛋白的重组蛋白的核酸，所述核酸序列如SEQ IDNO.2所示。

第三方面，本申请提供一种上述牙鲆肽聚糖识别蛋白的重组蛋白的制备方法，是通过以下技术方案得以实现的。

一种上述牙鲆肽聚糖识别蛋白的重组蛋白的制备方法，包括以下步骤：

S1.以牙鲆PGRP ORF区基因序列为模板，采用上、下游引物对其进行扩增得到目的DNA；上游引物序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物序列如SEQ ID NO.4所示；

S2.将扩增得到的目的DNA与Blunt E1质粒连接，转化感受态细胞，得到重组质粒；

S3.将构建成功的重组质粒转化表达菌株进行诱导培养，再进过纯化、复性后得到牙鲆肽聚糖识别蛋白的重组蛋白。

进一步的，步骤S3中，采用海狸磁珠对粗牙鲆肽聚糖识别蛋白的重组蛋白进行纯化。