[发明专利]InDel标记引物组及其在花椰菜‘DX-108’品种或种子纯度鉴定中的应用

说明书

本发明公开了InDel标记引物组及其在花椰菜品种‘DX‑108’或种子纯度鉴定中的应用。本发明利用花椰菜品种‘DX‑108’的父母本重测序数据在全基因组范围内筛选差异InDel位点并设计特异性引物筛选得到12对InDel标记引物，其核苷酸序列为SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.24所示。基于PCR扩增反应，采用该12对InDel分子标记引物可在短时间内快速精确完成‘DX‑108’花椰菜品种和杂交种子纯度鉴定，需要检测样品量少、周期短、方法简单快捷、鉴定结果准确，可控制杂交种‘DX‑108’的制种质量，解决了花椰菜‘DX‑108’品种鉴定存在的周期长、人工投入大、鉴定不准确等问题。

技术领域

本发明涉及花椰菜分子标记引物组及其应用，尤其涉及花椰菜InDel标记引物组及其在花椰菜‘DX-108’品种或种子纯度鉴定中的应用，属于花椰菜‘DX-108’品种或种子纯度的分子鉴定领域。

背景技术

花椰菜(Brassica oleracea var.Botrytis)是世界上最重要的蔬菜品种之一，因其花球营养丰富、风味鲜美而深受中西方消费者的喜爱。中国是世界上花椰菜种植和产量最大的国家。2018年，中国花椰菜产量达到1026万吨，占世界总产量的40.67％(FAO，2019)。作为高品质健康蔬菜的代表，其肉质茎与花序分生组织构成的花球富含维生素C与硫代葡萄糖苷类抗癌物质，符合当下国人对健康蔬菜的需求。

随着花椰菜品种数量逐年增多，少数骨干亲本的集中应用，品种间的遗传差异越来越小，难以进行有效鉴别，从源头有效地管理和甄别遗传背景相似的花椰菜品种是亟待解决的一大难题。目前，花椰菜品种的鉴定主要是通过形态学标记研究等传统手段，时间周期长，得到的结论往往不够完善，且很难剔除环境以及人为因素的影响。因此，有必要建立基于基因型的快速鉴定方法。

分子标记是在基因水平上的标记，直接在DNA分子水平上检测遗传变异，不受组织和器官种类、发育阶段、生境条件等诸多因素的影响，多态性高、遗传稳定。插入缺失长度多态性(Insertion-Deletion Length Polymorphism,InDel)标记是在等位基因位点上一定数量的核苷酸插入或缺失而产生的长度多态性变异，属于第三代分子标记，主要基于全基因组测序而开发，在基因组中比SSR(Simple Sequence Repeat)标记密度大，具有标记特异性高、稳定性好、检测方法简单、经济等优点，已成功应用于水稻、大豆、棉花等品种鉴定方面，克服了仅依据形态特征鉴定新品种的不确定性。

花椰菜品种‘DX-108’是由天津市农业科学院培育的高产、高品质的花椰菜杂交品种，属秋中晚熟品种，秋种成熟期85天左右。植株长势强，叶色深绿色，窄叶片；株型直立上冲紧凑，中内叶长，护球性好；花球极紧实，高圆，周正，洁白，球面较光滑。单球重1.63kg，亩产3912kg，比对照LUCKY增产7.95％。

迄今为止，尚未有适于花椰菜品种‘DX-108’的分子标记及其鉴定方法，开发适用于花椰菜品种‘DX-108’的分子鉴定标记，有利于规范花椰菜品种登记、加强市场监管和强化知识产权保护等。

发明内容

本发明的目的之一是提供用于鉴定花椰菜品种‘DX-108’品种真实性或种子纯度的InDel标记引物对组；

本发明的目的之二是提供用于鉴定花椰菜品种‘DX-108’真实性或者鉴定花椰菜杂交种‘DX-108’种子纯度的PCR检测试剂盒；

本发明的目的之三是将所述的InDel标记引物对组应用于鉴定花椰菜品种‘DX-108真实性或种子纯度等方面。

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：

本发明一方面提供了一种基于InDel标记的鉴定花椰菜品种‘DX-108’引物对组，所述引物对组由以下引物对1-引物对12共12对引物组成，所述12对引物的核苷酸序列分别为如下所示：