[发明专利]一种肾癌索拉非尼耐药细胞株及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种肾癌索拉非尼耐药细胞株的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

(a)将对数生长期的786-O细胞接种在培养瓶中并进行培养；

(b)待细胞融合至50％～60％时，向培养基中添加索拉非尼并进行传代培养，得到第三代细胞；再将第三代细胞依次置于索拉非尼浓度梯度递增的培养基中分别进行传代培养，其中，索拉非尼浓度梯度为1.8～2.2μM/L，每个培养基均传代培养至第三代细胞；

(c)待培养基中索拉非尼浓度不低于10μM/L时，传代培养50～70天，分离786-O细胞，即得所述肾癌索拉非尼耐药细胞株。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(b)中，向培养基中添加索拉非尼至终浓度为2～4μM/L。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(b)中，索拉非尼浓度梯度递增的培养基中最低索拉非尼浓度为4～6μM/L。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(a)中，培养采用的培养基为含10％胎牛血清的DMEM-f12培养液。

5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(a)中，培养温度为37℃，二氧化碳浓度为5％。

6.权利要求1～5任一所述的构建方法构建得到的肾癌索拉非尼耐药细胞株。

7.根据权利要求6所述的肾癌索拉非尼耐药细胞株，其特征在于，所述肾癌索拉非尼耐药细胞株的索拉非尼耐受浓度10uM/L。

8.如权利要求6或7所述的肾癌索拉非尼耐药细胞株在筛选抗肾癌药物中的应用。

9.如权利要求6或7所述的肾癌索拉非尼耐药细胞株在研究肾癌细胞耐药机制中的应用。