[发明专利]一种基于定量PCR鉴定鸭龄的方法

说明书

本发明公开了一种基于定量PCR鉴定鸭龄的方法。本发明基于不同年龄段鸭子肝脏的生长相关基因表达量的变化规律，利用定量PCR仪进行生长相关基因表达量测定，进而达到准确分析鸭子年龄的目的，本发明在发现鸭子肝脏中存在相关基因表达量与年龄紧密相关的基础上，通过设计生长相关基因定量分析的定量引物序列和建立定量分析鸭子年龄的技术体系，成功的形成在表达量测定有效范围判定鸭子年龄的方法。本发明方法的准确率大大提高，原来依据经验鉴定的准确率只有50％左右，而利用本发明生物标记能够将一年以上老鸭的鉴定准确率提高到99％以上。

技术领域

本发明属于家禽养殖技术领域，尤其涉及一种基于定量PCR鉴定鸭龄的方法。

背景技术

老鸭煲是用一年以上的成老鸭作为主料，以酸萝卜、金华火腿、香菇、干笋作为辅料，葱、姜、盐、酱油、料酒、白胡椒粉、鸡精、高汤、食用油作为调料熬制的一道江南名菜。因其味道鲜美，富含B族维生素和维生素E等，并能有效抵抗神经炎和多种炎症，还能抗衰老而被消费者喜爱。其中以江浙一带利用一年以上麻鸭为主料烹饪的老鸭煲最为盛名和鲜美。因此一年以上的老鸭价格也较普通的肉鸭和青年鸭价格要高些。由于老鸭需要有经验的厨师或长期从事人员进行主观鉴定，使得市场上不法商贩，利用青年肉鸭放养充当老鸭进行销售的情况，对于老鸭产业的进一步扩大影响较大。如何建立老鸭年龄量化指标评定方法是产业急需解决的关键问题。

目前依据鸭生命有机体的发育过程随年龄增长而变化的趋势，发现变化最为明显的生长因子相关基因为老鸭年龄鉴定的最佳模式，其中肝脏作为生命有机体受生长因子调控最为敏感的器官，具有在不同的代谢水平以适应鸭生长发育的需求。

综上所述，现有技术存在的问题是：传统老鸭鉴定方法难以量化确定，需要经验厨师烹饪后确定；并且难以标准化操作。而要解决这一问题关键就在于系统化研究不同养殖阶段的鸭关键生物标记，形成科学合理的老鸭年龄鉴定方法，为老鸭产业提供技术支撑。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于定量PCR鉴定鸭龄的方法，旨在解决传统老鸭鉴定方法难以量化确定的问题。

本发明是这样实现的，一种基于定量PCR鉴定老鸭的方法，该方法包括以下步骤：

(1)分别提取被鉴定个体以及一组一年鸭龄以上老鸭的新鲜鸭肝脏组织的总RNA并反转录为cDNA；

(2)以β-Actin作为内参基因，并以年龄协同基因GSH或IGF为目标基因，定量分析检测出被鉴定个体的GSH相对△CT值或IGF相对△CT；

以及，定量分析检测出该组所述老鸭的GSH平均△CT值或IGF平均△CT值；

(3)将所述GSH相对△CT值减去所述GSH平均△CT值，得到被鉴定个体的GSH相对差值△△CT，并计算被鉴定个体的GSH基因相对表达量2^-△△CT值，当GSH基因相对表达量2^-△△CT值小于统计设定值A时，判断该被鉴定个体为1年以上的老鸭；

或者，将所述IGF相对△CT减去所述IGF平均△CT值，得到被鉴定个体的IGF相对差值△△CT，并计算被鉴定个体的IGF表达量2^-△△CT值，当IGF表达量2^-△△CT值小于统计设定值B时，判断该被鉴定个体为1年以上的老鸭。

优选地，在步骤(2)中，所述定量分析检测中，IGF的定量分析的引物序列为：

IGF F：5’-GGACATATGGAACGTGACA’-3；

IGF R：5’-CCAGATGAGGACAGGAGT’-3。

优选地，在步骤(2)中，所述定量分析检测中，GSH的定量分析的引物序列为：

GSH F：5’-TTGAGTGCTGCATCTCCGTT-3’；