[发明专利]一种鸭线粒体COI基因扩增引物及其应用

权利要求书

1.一种鸭线粒体COI基因扩增引物，其特征在于，该引物序列为：

上游引物序列为COI-F：5'-CCATCTTACCCGTGACCT-3'；

下游引物序列为COI-R：5'-TGGCTTGAAACCAGTGTA-3'。

2.一种如权利要求1所述的鸭线粒体COI基因扩增引物在鸭的遗传多样性研究和种质资源的保护开发中的应用。

3.一种如权利要求1所述的鸭线粒体COI基因扩增引物的设计方法，其特征在于，包括以下步骤：

登陆美国国立生物技术信息中心下载已有绿头野鸭线粒体基因组全序列，序列号为NC_009684.1；

在下载的所述线粒体基因组序列中定位COI基因的位置，其两端各延伸100bp，并保存此部分序列；

在所获得的序列中用引物设计软件Primer Premier 6.0进行上下游引物的设计。

4.一种利用如权利要求1的鸭线粒体COI基因扩增引物鉴定鸭线粒体COI基因的方法，其特征在于，采用所述鸭线粒体COI基因扩增引物对鸭的DNA模板溶液进行PCR扩增，获得PCR产物，通过sanger测序法验证PCR扩增产物。

5.根据权利要求4所述的一种利用鸭线粒体COI基因扩增引物鉴定鸭线粒体COI基因的方法，其特征在于，PCR扩增条件为：94℃预变性5min；然后94℃变性30s、55℃退火30s、72℃延伸1min，重复35次循环，最后72℃延伸10min。

6.根据权利要求4所述的一种利用鸭线粒体COI基因扩增引物鉴定鸭线粒体COI基因的方法，其特征在于，PCR扩增体系包括：灭菌水、2×Hieff PCR Master Mix、上游引物、下游引物和DNA模板。

7.根据权利要求6所述的一种利用鸭线粒体COI基因扩增引物鉴定鸭线粒体COI基因的方法，其特征在于，PCR扩增体系为50μL，包括：灭菌水9.5μL，2×Hieff PCR Master Mix12.5μL，10μmol/L的上、下游引物各为1.0μL，100ng/μL的DNA模板溶液1.0μL。

8.根据权利要求7所述的一种利用鸭线粒体COI基因扩增引物鉴定鸭线粒体COI基因的方法，其特征在于，所述DNA模板溶液采用DNA提取试剂盒法提取，并用灭菌水稀释至100ng/μL。

9.根据权利要求4所述的一种利用鸭线粒体COI基因扩增引物鉴定鸭线粒体COI基因的方法，其特征在于，PCR扩增后，鸭线粒体COI基因的片段长度为1551bp。