[发明专利]土壤样品和沉积物样品中抗生素的快速高通量检测方法

权利要求书

1.土壤样品和沉积物样品中抗生素的快速高通量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、标准曲线绘制

以甲醇为溶剂，分别配制抗生素单标准溶液和不同质量浓度的抗生素混合标准溶液，以峰面积为纵坐标，以目标物的质量浓度为横坐标，绘制标准曲线；

步骤2、土壤样品和沉积物样品前处理

将土壤样品或沉积物样品先冷冻干燥，然后研磨过筛，之后准确称取2g土壤样品或沉积物样品待用；

步骤3、萃取

向称好的2g土壤样品或沉积物样品中加入20mL CS-乙腈提取液和100μL体积浓度为1％的乙酸溶液，超声萃取30min；

步骤4、盐析

向超声萃取后的溶液中加入4g无水硫酸镁和1g柠檬酸三钠，进行盐析离心分层，最后取上清液5mL至棕色玻璃瓶中；

步骤5、氮吹浓缩定容

将上清液氮吹近干后用适量甲醇溶解，经滤膜过滤后转移至进样瓶中，再次氮吹近干后加甲醇溶解定容至1ml，得到土壤样品溶液或沉积物样品溶液；

步骤6、高效液相色谱串联质谱测定

利用高效液相色谱串联质谱测定目标物色谱峰面积；

步骤7、外标法定量

基于高效液相色谱串联质谱检测出的目标物色谱峰面积，通过步骤1绘制出的标准曲线计算土壤样品溶液或沉积物样品溶液中抗生素的浓度。

2.根据权利要求1所述的土壤样品和沉积物样品中抗生素的快速高通量检测方法，其特征在于，在步骤1中，所述抗生素包括：金霉素、去甲金霉素、强力霉素、土霉素、四环素、磺胺氯吡嗪、磺胺嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、甲氧苄啶、环丙沙星、洛美沙星、诺氟沙星、阿奇霉素、林可霉素、罗红霉素、螺旋霉素、泰乐菌素、阿莫西林、青霉素G、青霉素V和氯霉素，共计25种。

3.根据权利要求1所述的土壤样品和沉积物样品中抗生素的快速高通量检测方法，其特征在于，在步骤2中，土壤样品和沉积物样品研磨后过100目筛。

4.根据权利要求1所述的土壤样品和沉积物样品中抗生素的快速高通量检测方法，其特征在于，在步骤3中，所述CS-乙腈提取液是采用如下方法配制而成的：

(1)配制质量浓度为50％的硝酸镁溶液和体积浓度为2.5％的氨水溶液，将二者按照体积比96:4混合，得到硝酸镁-氨水混合液；

(2)取10.56g磷酸二氢钠和0.82mL磷酸加水溶解并稀释至1L，得到磷酸盐溶液；取80.0g乙二胺四乙酸二钠溶解至1L磷酸盐溶液中，得到乙二胺四乙酸二钠-磷酸盐混合液；将乙二胺四乙酸二钠-磷酸盐混合液与乙腈按照体积比1:1混合，得到乙腈混合液；

(3)将上述乙腈混合液与硝酸镁-氨水混合液按照体积比3:1混合，得到CS-乙腈提取液。

5.根据权利要求1所述的土壤样品和沉积物样品中抗生素的快速高通量检测方法，其特征在于，在步骤4中，盐析离心分层的具体操作如下：

向超声萃取后的溶液中加入无水硫酸镁和柠檬酸三钠后，立即强力振摇3min，再超声10min，然后以5000r/min的转速离心10min，最后取上清液。

6.根据权利要求1所述的土壤样品和沉积物样品中抗生素的快速高通量检测方法，其特征在于，在步骤6中，高效液相色谱是在如下条件下进行的：

色谱柱为Waters-ACQUITY UPLC BEH C18，规格为100*2.1mm、1.7μm；柱温为35℃；流动相A为含有0.01％甲酸的水溶液，流动相B为100％乙腈溶液；进样体积为5μL，流动相流速为0.5mL/min；每个样品检测时间为15min，流动相洗脱程序见下表：

7.根据权利要求1所述的土壤样品和沉积物样品中抗生素的快速高通量检测方法，其特征在于，在步骤6中，串联质谱是在如下条件下进行的：

选择电喷雾离子源，同时进行正离子模式和负离子模式扫描检测；离子喷雾电压：正离子模式5500V，负离子模式-4500V；气帘气压力为40psi；喷雾气压力为55psi；辅助加热气压力为55psi，25种抗生素的质谱检测参数见下表：