[发明专利]重组VEGFB的制备方法与应用

权利要求书

1.试剂组合，其特征在于，包括包涵体溶解液、平衡液1、平衡液2、平衡液3、洗脱液和复性液；

所述包涵体溶解液包括水和Tris 1.1～1.3mg/mL，NaH₂PO₄.2H₂O 15～16mg/mL，DTT3.0～3.2mg/mL和盐酸胍5.5～6.0g/L，pH值为8.3～8.7；

所述平衡液1包括水和Tris 120～125mg/L，NaH₂PO₄.2H₂O 1.5～1.6g/L，盐酸胍57～58g/L，pH值为8.3～8.7；

所述平衡液2包括水和尿素350～370g/L，NaH₂PO₄.2H₂O 15～16g/L，Tris 1.1～1.3g/L，pH值为6.3～6.7；

所述平衡液3包括水和尿素350～370g/L，NaH₂PO₄.2H₂O 15～16g/L，Tris 1.1～1.3g/L，pH值为5.5～6.0；

所述洗脱液包括水和尿素350～370g/L，NaH₂PO₄.2H₂O 15～16g/L，Tris 1.1～1.3g/L，咪唑33～35g/L，pH值为5.5～6.0；

所述复性液包括水和NaH₂PO₄.2H₂O 15～16g/L，Tris 1.1～1.3g/L，DTT 33～35g/L，pH值为5.5～6.0。

2.根据权利要求1所述的试剂组合，其特征在于，

所述包涵体溶解液由水和如下组分组成：Tris 1.21mg/mL，NaH₂PO₄.2H₂O 15.6mg/mL，DTT 3.09mg/mL和盐酸胍5.731g/L，pH值为8.5；

所述平衡液1由水和如下组分组成：Tris 121mg/L，NaH₂PO₄.2H₂O 1.56g/L，盐酸胍57.31g/L，pH值为8.5；

所述平衡液2由水和如下组分组成：尿素360.36g/L，NaH₂PO₄.2H₂O 15.601g/L，Tris1.211g/L，pH值为6.5；

所述平衡液3由水和如下组分组成：尿素360.36g/L，NaH₂PO₄.2H₂O 15.601g/L，Tris1.211g/L，pH值为5.8；

所述洗脱液由水和如下组分组成：尿素360.36g/L，NaH₂PO₄.2H₂O 15.601g/L，Tris1.211g/L，咪唑34.04g/L，pH值为5.8；

所述复性液由水和如下组分组成：NaH₂PO₄.2H₂O 15.601g/L，Tris 1.211g/L，DTT34.04g/L，pH值为5.8。

3.一种重组VEGFB的纯化方法，其特征在于，以权利要求1或2所述的试剂组合进行纯化，包括如下步骤：

步骤1：将重组VEGFB的包涵体以所述包涵体溶解液溶解，离心后取上清液；

步骤2：以平衡液1平衡Ni²⁺柱，然后将上清液上样，依次以所述平衡液2和所述平衡液3冲洗后，以洗脱液洗脱，收集洗脱峰；

步骤3：将洗脱峰以所述复性液进行复性，离心后收集上清液，；

步骤4：用所述平衡液3平衡凝胶层析柱，然后将步骤3所述上清液上样于层析柱，收集目标蛋白峰，即为含有重组VEGFB的溶液。

4.根据权利要求3所述的纯化方法，其特征在于，步骤1中，

所述包涵体与包涵体溶液的质量-体积比为1g：10mL；

所述离心的条件为4℃，10000rpm离心20min。