[发明专利]聚酮合酶PreuA-TEPreu3

说明书

本发明涉及一种聚酮合酶PreuA‑TE_Preu3的构建及其在制备苔色酸中的应用，属于分子生物学与生物化学技术领域。本发明首次以光黑壳属真菌来源的聚酮合酶Preu3与PreuA为材料，基于组合生物合成技术构建了新型“非天然”聚酮合酶PreuA‑TE_Preu3；将其转入酿酒酵母，成功获得可高效生产苔色酸的突变株；并以制备的苔色酸为对象，研究了其对八种临床耐药细菌以及七种农作物病原真菌的抑制活性，发现其对耐碳青霉烯铜绿假单胞菌有很强的拮抗作用（MIC，12.5μg/mL）。本发明极大地丰富了苔色酸的生产来源，对于拓展其衍生化途径，研发新型抗菌剂有重要的科学价值和应用前景。

技术领域

本发明属于分子生物学与生物化学技术领域，具体涉及一种新型“非天然”聚酮合酶PreuA-TE_Preu3的构建及其在制备苔色酸中的应用。

背景技术

真菌聚酮化合物（polyketides, PKs）是一大类重要的天然产物类群，具有化学结构和生物活性多样性，是新型药物先导化合物发现的优质资源库。代表性的真菌PKs有降低胆固醇功效的洛伐他汀（lovastatin）、真菌抑制剂灰黄霉素（griseofulvin）、细菌抑制剂利福霉素（rifamycin）、免疫抑制剂霉酚酸（mycophenolic acid）、肌动蛋白和血管生成抑制剂细胞松弛素E（cytochalasin E）等。PKs生物合成的关键酶——真菌聚酮合酶（polyketide synthase，PKS）为迭代（iterative）型PKS，结构域通常包括：起始单元ACP转酰酶（starter unit ACP transacylase，SAT）、β-酮酰基合成酶（β-ketoacylsynthase,KS）、酰基转移酶（acyltransferase, AT）、产物模板（product template, PT）、酰基载体蛋白（acyl carrier protein, ACP）、酮基还原酶（ketoreductase, KR）、脱水酶（dehydratase, DH）、烯基还原酶（enoylreductase, ER）、甲基转移酶（methyltransferase, CMeT）以及硫酯酶（thioesterase, TE）或还原酶（reductase, R）。其中，TE负责将聚酮合酶合成的产物进行释放。