[发明专利]重组前融合状态新冠刺突蛋白的制备方法有效
| 申请号： | 202110970870.1 | 申请日： | 2021-08-23 |
| 公开（公告）号： | CN113755523B | 公开（公告）日： | 2022-04-22 |
| 发明（设计）人： | 项阳;李军;张福城;余乐;张云;谭焱 | 申请（专利权）人： | 武汉爱博泰克生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/62;C12N15/113 |
| 代理公司： | 北京金智普华知识产权代理有限公司 11401 | 代理人： | 张晓博 |
| 地址： | 430078 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新二*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 融合 状态 新冠刺突 蛋白 制备 方法 | ||
1.一种制备前融合状态的重组SARS-CoV-2刺突蛋白的方法，包括：使用CRISPR Cas9转染技术制备无法表达弗林蛋白酶但能表达 SARS-CoV-2 刺突蛋白的宿主细胞，使用的sgRNA1支架序列为：GATGCGCACAGCCCACGTGT，如SEQ ID NO:19所示和sgRNA2支架序列ACAGTGTGGCACGGAAGCAT，如SEQ ID NO:20所示；
在所述宿主细胞中表达SARS-CoV-2 刺突蛋白；
所述宿主细胞为运用CRISPR Cas9技术敲除细胞中的弗林蛋白酶基因后的HEK293细胞。
2.根据权利要求1所述的方法，所述sgRNA被整合至载体中。
3.根据权利要求2所述的方法，构建的正向和反向 sgRNA 载体包含以下正向和反向sgRNA支架序列：
Vector-sgRNA1 forward: CACC-GATGCGCACAGCCCACGTGT，如SEQ ID NO:5所示；Vector-sgRNA1 reverse: AAAC-ACACGTGGGCTGTGCGCATC，如SEQ ID NO:6所示； Vector-sgRNA2 forward: CACC-ACAGTGTGGCACGGAAGCAT，如SEQ ID NO:7所示；和Vector-sgRNA2reverse: AAAC-ATGCTTCCGTGCCACACTGT ，如SEQ ID NO:8所示。
4.根据权利要求1所述的方法，还包括将载体蛋白与 SARS-CoV-2 刺突蛋白结合的步骤。
5.根据权利要求4所述的方法，所述载体蛋白包括脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白复合物、破伤风类毒素蛋白、白喉毒素衍生物、牛血清白蛋白、阳离子化牛血清白蛋白、Concholepasconcholepas血蓝蛋白、乙型肝炎病毒蛋白、匙孔血蓝蛋白、轮状病毒衣壳蛋白，牛乳头瘤病毒的 L1 蛋白、人乳头瘤病毒的 L1 蛋白、卵清蛋白和流感血凝素蛋白。
6.根据权利要求5所述的方法，所述乙型肝炎病毒蛋白为表面抗原蛋白或乙肝病毒核心抗原蛋白。
7.根据权利要求5所述的方法，所述血凝素蛋白来自血凝素 A 亚型 H1 至 H17。
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