[发明专利]一种提高2′-岩藻糖基乳糖产量的枯草芽孢杆菌及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种提高2’-岩藻糖基乳糖产量的枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌是以枯草芽孢杆菌168为出发菌株，构建基因片段P_srfa-fkp，采用组成型启动子P_srfa在基因组上表达外源基因双功能酶L-岩藻糖激酶fkp；构建基因片段P₄₃-futC、P₄₃-glcp及P₄₃-lac12，采用组成型启动子P₄₃在基因组上分别表达外源基因α-1，2-岩藻糖基转移酶futC、乳糖转运酶lac12及内源性基因单糖转运蛋白酶glcp；所述P_srfa-fkp、P₄₃-futC、P₄₃-glcp及P₄₃-lac12的基因序列如SEQ ID NO .1~SEQ ID NO .4所示。

2.一种如权利要求1所述的提高2’-岩藻糖基乳糖产量的枯草芽孢杆菌的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括以下步骤：

（1）以枯草芽孢杆菌168为出发菌株，利用组成型启动子P_srfa在基因组上过表达来源于脆弱拟杆菌Bacteriodes fragilis 9343的双功能酶L-岩藻糖激酶fkp，构建枯草芽孢杆菌WCY1；

（2）以枯草芽孢杆菌WCY1为出发菌株，利用组成型启动子P₄₃在基因组上过表达来源于幽门螺杆菌H. pylori的α-1，2-岩藻糖基转移酶FutC，构建枯草芽孢杆菌WCY2；

（3）以枯草芽孢杆菌WCY2为出发菌株，利用组成型启动子P₄₃在基因组上过表达内源性基因单糖转运蛋白酶glcp，构建枯草芽孢杆菌WCY3；

（4）以枯草芽孢杆菌WCY2为出发菌株，选择RBS序列GCTTAAAAGGAGGTTTTTTTT，并利用组成型启动子P₄₃在基因组上过表达内源性基因单糖转运蛋白酶glcp，构建枯草芽孢杆菌WCY4；

（5）以枯草芽孢杆菌WCY4为出发菌株，选择RBS序列GAATAAAAGGAGAGTTTTTTTT，并利用组成型启动子P₄₃在基因组上过表达乳糖转运酶lac12，构建枯草芽孢杆菌WCY5；

（6）以枯草芽孢杆菌WCY5为出发菌株，选择RBS序列GTCTTATTAAAGGAGGTTTTTTTT替换WCY5菌株双功能酶L-岩藻糖激酶fkp基因原始RBS，构建枯草芽孢杆菌WCY6；

（7）以枯草芽孢杆菌WCY6为出发菌株，选择RBS序列GGGGAGAAGACTCCGCTCGAAAGGAGGTTTTTATT替换WCY6菌株α-1，2-岩藻糖基转移酶 futC基因原始RBS，构建枯草芽孢杆菌WCY7，即得所述枯草芽孢杆菌。

3.一种如权利要求1所述的提高2’-岩藻糖基乳糖产量的枯草芽孢杆菌在合成2 '-岩藻糖基乳糖中的应用。