[发明专利]一种基于多靶标环介导等温扩增技术可视化检测新型冠状病毒的引物组组合及试剂盒

说明书

本发明提供了一种基于多靶标环介导等温扩增技术可视化检测新型冠状病毒(SARS‑CoV‑2)的引物组组合及试剂盒，同时选取SARS‑CoV‑2 Orf1ab、E、N作为检测靶基因，设计3套LAMP引物组同时检测新型冠状病毒，可有效降低由于新型冠状病毒基因突变而导致假阴性。同时结合HNB染料或pH指示剂比色法肉眼观察检测RT‑LAMP扩增产物，从而开发出一种可视化检测新冠病毒(SARS‑CoV‑2)的方法，具有灵敏度高、特异性好、简单易用等优点，可基本满足现场快速、简便检测新冠病毒(SARS‑CoV‑2)的需求。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种基于多靶标环介导等温扩增技术可视化检测新型冠状病毒的引物组组合及试剂盒。

背景技术

环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)是一种快速、简单、灵敏、特异且成本低的非PCR核酸等温扩增方法，克服了传统PCR需要模板高温变性、温度循环、凝胶电泳、紫外扫描记录等复杂过程，能在30～60分钟内实现靶基因10⁹～10¹⁰倍扩增。当前，LAMP技术已经成功应用于病毒、细菌、寄生虫等病原体的快速分子检测。

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的高效、精准检测是有效控制新冠疫情的重要手段，因此快速、准确的SARS-CoV-2检测技术成为目前研发的热点。现有SARS-CoV-2检测方法主要有以下几种：1)实时荧光RT-PCR检测新型冠状病毒核酸阳性；2)病毒基因测序，与已知的新型冠状病毒高度同源；3)新型冠状病毒特异性IgM抗体和IgG抗体阳性；4)新型冠状病毒特异性IgG抗体由阴性转为阳性或恢复期IgG抗体滴度较急性期呈4倍及以上升高。其中方法3)和4)属血清学检测，检测结果受试剂本身阳性判断值原因，或者体内存在干扰物质(类风湿因子、嗜异性抗体、补体、溶菌酶等)，或者标本原因(标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存时间过长、标本凝固不全等)，检测结果可能会出现假阳性，因此一般不单独以血清学检测(方法3，4)作为诊断依据。方法1)和2)都基于核酸扩增技术，尽管能够精准、高效检测SARS-CoV-2基因，但二者依赖于精密、昂贵的荧光定量PCR仪或基因测序仪，且耗时较长，对人员和设备的要求较高，限制其在基层医疗机构及疫情防控一线的应用。

因此迫切需要开发准确高效，简便易用的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)检测方法应用于现场快速、简便筛查。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于多靶标环介导等温扩增技术可视化检测新型冠状病毒的引物组组合及试剂盒，不仅灵敏度高、特异性好，而且可以实现肉眼可视化检测。

本发明具体技术方案如下：

一种基于多靶标环介导等温扩增技术可视化检测新型冠状病毒的引物组组合，包括检测新冠病毒SARS-CoV-2的Orf1ab基因的LAMP引物组和检测新冠病毒SARS-CoV-2的N基因的LAMP引物组和检测新冠病毒SARS-CoV-2的E基因的LAMP引物组；

所述检测新冠病毒SARS-CoV-2的Orf1ab基因的LAMP引物组包括2条外引物：S1-1ab-F3和S1-1ab-B3、两条内引物：S1-1ab-FIP和S1-1ab-BIP和两条环引物：S1-1ab-LF和S1-1ab-LB；

所述S1-1ab-F3的核苷酸序列为：5'-TGCAACTAATAAAGCCACG-3'(SEQ ID NO:1)；

所述S1-1ab-B3的核苷酸序列为：5'-CGTCTTTCTGTATGGTAGGATT-3'(SEQ ID NO:2)；

所述S1-1ab-FIP的核苷酸序列为：

5'-TCTGACTTCAGTACATCAAACGAATAAATACCTGGTGTATACGTTGTC-3'(SEQ ID NO:3)；