[发明专利]检测半滑舌鳎TLR2和NF-κB基因表达水平的引物及方法

权利要求书

1.一种用于非诊断目的检测半滑舌鳎TLR2、NF-κB基因表达水平的实时荧光定量PCR的引物，其特征在于：所述引物包括半滑舌鳎TLR2和NF-κB基因的特异性上、下游引物；

其中，半滑舌鳎TLR2基因的特异性上、下游引物序列如下：

TLR2 F：SEQ ID NO.1；

TLR2 R：SEQ ID NO.2；

半滑舌鳎NF-κB基因的特异性上、下游引物序列如下：

NF-κB F：SEQ ID NO.3；

NF-κB R：SEQ ID NO.4。

2.一种利用如权利要求1所述的引物的用于非诊断目的检测半滑舌鳎TLR2和NF-κB基因表达水平的实时荧光定量PCR的方法，其特征在于：步骤如下：

(1)逆转录合成得到半滑舌鳎组织cDNA第一链；

(2)分别以TLR2 F和TLR2 R、NF-κB F和NF-κB R为引物，用实时荧光定量PCR法检测TLR2和NF-κB基因表达水平。

3.根据权利要求2所述的用于非诊断目的检测半滑舌鳎TLR2和NF-κB基因表达水平的实时荧光定量PCR的方法，其特征在于：所述步骤(1)具体为：

以半滑舌鳎组织的总RNA为模板，逆转录合成得到半滑舌鳎组织cDNA第一链。

4.根据权利要求2所述的用于非诊断目的检测半滑舌鳎TLR2和NF-κB基因表达水平的实时荧光定量PCR的方法，其特征在于：所述步骤(2)中实时荧光定量PCR法的PCR扩增体系如下：

TB Green Premix Ex Taq II 2×10μL，上、下游引物各0.8μL，cDNA模板2μL，去离子水6.4μL，总计20μL，上、下游引物终浓度均为0.4μM。

5.根据权利要求2所述的用于非诊断目的检测半滑舌鳎TLR2和NF-κB基因表达水平的实时荧光定量PCR的方法，其特征在于：所述步骤(2)中实时荧光定量PCR法的PCR反应条件为：

95℃预变性30s；95℃变性5s，60℃退火30s，运行40个循环；95℃5s，60℃1min，运行1个循环；50℃30s降温。

6.根据权利要求2至5任一项所述的用于非诊断目的检测半滑舌鳎TLR2和NF-κB基因表达水平的实时荧光定量PCR的方法，其特征在于：所述步骤(2)中采用2^-ΔΔCT相对定量方法计算不同样品的TLR2和NF-κB基因表达。

7.一种包含如权利要求2至6任一项所述的方法的用于检测半滑舌鳎TLR2和NF-κB基因表达水平的试剂盒。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中包括荧光染料，荧光染料为SYBR Green荧光染料。