[发明专利]胃癌特异性LncRNA-GACAT3的检测装置

权利要求书

1.胃癌特异性LncRNA-GACAT3的检测装置，其特征在于：包括：

数据库，用于存储LncRNA-GACAT3核酸序列码，所述数据库为Genebank数据库；

PCR扩增平台，用于对LncRNA-GACAT3核酸序列码进行PCR扩增，从而得到目的扩增片段；

重组质粒构建体系，用于将目的扩增片段进行酶切及载体连接后得到重组质粒及阴性对照质粒；

鉴定体系，用于对所述重组质粒和阴性对照质粒进行筛选，并对经酶切鉴定及测序鉴定合格后的重组质粒进行浓度计算，以检测LncRNA-GACAT3的含量。

2.根据权利要求1所述的胃癌特异性LncRNA-GACAT3的检测装置，其特征在于：所述PCR扩增体系还包括：设计的引物、探针；所设计的引物为：

上游引物：5’-CCGGAATTCAAGGAGGCCCAATGATG-3’；

下游引物：5’-CGCGGATCCTCTTTGTGCTTAATTTGCA-3’；

所设计的探针为：

探针：5’-6FAM-TGCTTRACTTTTCAGTTGTC-MGB-3’。

3.根据权利要求2所述的胃癌特异性LncRNA-GACAT3的检测装置，其特征在于：所述PCR扩增平台中，将LncRNA-GACAT3核酸序列码做为扩增模板，将扩增模板、引物、探针及PCRMaster Mix进行混合，进行定量PCR扩增，得到PCR扩增产物。

4.根据权利要求3所述的胃癌特异性LncRNA-GACAT3的检测装置，其特征在于：所述PCR扩增平台还连接有电泳仪和电泳槽，将所述PCR扩增产物放置在电泳槽中，在一个100V恒定的电压下，PCR扩增产物由负极向正极进行泳动，根据PCR扩增产物自身分子量大小不同从而分离得到目的扩增片段。

5.根据权利要求4所述的胃癌特异性LncRNA-GACAT3的检测装置，其特征在于：所述重组质粒构建体系包括载体连接体系，所述载体连接体系中有pUC57载体；载体连接体系将目的扩增片段经过EcoRI、BamHI双酶切后，与所述pUC57载体进行连接，获得重组质粒。

6.根据权利要求5所述的胃癌特异性LncRNA-GACAT3的检测装置，其特征在于：所述载体连接体系将目的扩增片段与pUC57载体进行连接时，载入2ul目的扩增片段、5ul的2×Buffer溶液、1ul的pUC57载体、1ul的T4 DNA连接酶、1ul的无菌水进行混匀，混匀后室温放置一小时，4度连接过夜。

7.根据权利要求5所述的胃癌特异性LncRNA-GACAT3的检测装置，其特征在于：所述重组质粒构建体系还包括转化体系，所述转化体系将1ul重组质粒放入100ul的DH5α感受态细胞中混匀，再加入800ul的LB培养液经过振荡、离心后，均匀涂布在Amp+筛选平板上，设置未转化菌作为阴性对照质粒。

8.根据权利要求7所述的胃癌特异性LncRNA-GACAT3的检测装置，其特征在于：所述鉴定体系包括酶切鉴定体系、测序鉴定体系，所述酶切鉴定体系用于接入重组质粒和阴性对照质粒，并将重组质粒和阴性对照质粒酶切后进行电泳，根据分子量大小进行鉴定；所述测序鉴定体系将电泳后目标条带进行核酸测序，根据核酸序列进行鉴定。

9.根据权利要求8所述的胃癌特异性LncRNA-GACAT3的检测装置，其特征在于：所述鉴定体系还包括质量及浓度计算体系，所述质量及浓度计算体系对鉴定后的重组质粒测吸光度值计算出浓度，并且计算出重组质粒的原始拷贝数：

原始拷贝数＝(重组质粒浓度×重组质粒体积/重组质粒相对分子质量)×6.02×10²³。

10.根据权利要求8所述的胃癌特异性LncRNA-GACAT3的检测装置，其特征在于：所述PCR扩增平台用于通过荧光定量对重组质粒进行扩增，以实现对LncRNA-GACAT3的定量检测；

所述PCR扩增平台的引物、探针：

上游引物：5’-CCGGAATTCAAGGAGGCCCAATGATG-3’；

下游引物：5’-CGCGGATCCTCTTTGTGCTTAATTTGCA-3’；

探针：5’-6FAM-TGCTTRACTTTTCAGTTGTC-MGB-3’；

所述PCR扩增平台的扩增体系为：10ul的PCR Master Mix、0.4ul的上游引物、0.4ul的下游引物、0.8ul的探针、2ul的扩增模板、6.4ul的蒸馏水后，进行PCR扩增反应。