[发明专利]野生白鬼笔组织分离制备母种方法

说明书

本发明公开了野生白鬼笔组织分离制备母种方法，涉及农业科技技术领域。本发明以自然野外生长的白鬼笔菌蕾和开伞白鬼笔为分离原材料，通过无菌处理，获得无菌分离材料菌托包被，将菌托包被分离在专用母种培养基上培养，待菌丝萌发后转移至专用木屑培养基中获得木屑培养基母种，再通过菌丝尖端提纯复壮得到纯化母种，最后通过子实体组织分离进行系统选育，经过系统培育，人工驯化，得到性状稳定、可用于繁殖生产的白鬼笔木屑母种。本发明公开了野生白鬼笔组织分离制备母种方法，能够有效的利用采集的白鬼笔野生资源，解决菌蕾成熟或已开伞的白鬼笔难以有效分离的难题，为白鬼笔的优质种源收集和良种选育奠定了技术基础。

技术领域

本发明涉及农业科技技术领域，尤其涉及野生白鬼笔组织分离制备母种方法。

背景技术

白鬼笔(Phallus impudicus L.ex.Pers.)，又称竹下菌、男荪、无裙荪等，为担子菌纲、鬼笔目、鬼笔科、鬼笔属真菌。夏秋冬季于林下腐殖质层中单生或群生，分布于贵州、四川、云南、安徽、广东等地。白鬼笔是一种珍稀食用菌，菌体洁白，味道鲜美，口感松脆、细嫩、爽口，营养丰富，含近二十种氨基酸，还含有人体所需的十多种维生素及多种微量元素，是一种极佳的营养滋品。

白鬼笔菌柄可入药，药性为甘，淡，性温，有活血止痛，祛风除湿的功效，可用于治疗风湿痛。白鬼笔还能抑制腐败菌生长，可作为食品的短期防腐剂。白鬼笔在国外，如法国和德国的一些地区也深受消费者青睐，超市里常有新鲜或者腌制的白鬼笔销售，国内主要销往北京、上海、天津、昆明等城市。

目前对白鬼笔的研究很多，如2013年桂阳对白鬼笔的出菇特性进行了阐述；2010年卢东升对白鬼笔的菌蕾、子实体以及菌丝形态征进行了大致的研究阐述，但是对于白鬼笔的菌种制作技术，研究则相对较少。目前，白鬼笔菌种的获取方法主要是采集未成熟的菌蛋用木屑培养基进行组织分离，很少有菌种制作单位采用斜面进行分离，也没有进行菌种的组织分离的相关研究。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于公开野生白鬼笔组织分离制备母种方法，能够有效的利用采集的白鬼笔野生资源，解决菌蕾成熟或已开伞的白鬼笔难以有效分离的难题，为白鬼笔的优质种源收集和良种选育奠定了技术基础。

具体的，本发明的野生白鬼笔组织分离制备母种方法，所述方法是采用野生白鬼笔的菌柄包被组织进行组织分离并纯化后得到母种。

进一步，所述方法具体包括以下步骤：

S1：采集自然野外生长的白鬼笔菌蕾和开伞白鬼笔，获得分离原材料；

S2：通过无菌处理，获得无菌分离材料菌柄包被，将菌柄包被转入母种培养基中进行培养；

S3：培养至菌丝萌发转移至木屑培养基中获得木屑培养基母种；

S4：通过菌丝尖端提纯复壮得到纯化母种，转接原种、栽培种，最后通过仿野生种植进行栽培得到子实体；

S5：通过子实体组织分离进行系统选育，经过3-5年的系统培育，人工驯化，得到性状稳定、可用于繁殖生产的白鬼笔母种。

进一步，所述S2步骤具体为：在无菌超净台上，对于未开伞的白鬼笔菌蕾，用75％酒精浸泡表面消毒后，用无菌吸水纸吸干表面水分，再用灼烧烫的解剖刀纵向切开菌蕾，用无菌镊子夹掉菌柄，使菌柄包被露出，夹取菌柄包被大小为5mm见方的组织转入母种培养基中进行培养；

对于开伞白鬼笔，先齐菌托处切掉菌柄，将子实体倒立用75％酒精冲洗干净，再用无菌水冲洗，最后用无菌纸擦拭，用无菌镊子分开菌托，去掉菌柄，再用无菌镊子夹取菌柄包被大小为5mm见方的组织转入母种培养基中进行培养。

进一步，每升所述母种培养基包括以下原料：青杠木屑40g，箭竹叶10g，马铃薯200g，葡萄糖20g，蛋白胨5g，琼脂粉10g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g。