[发明专利]制备细胞基片的方法、制备试剂盒的方法及联检方法

权利要求书

1.一种制备用于多病原体联检的细胞基片的方法，所述方法包括以下步骤：

步骤S1将多种病原体分别进行细胞传代培养；

步骤S2将多种病原体中的至少两种传代细胞分别制成细胞悬液；

步骤S3将制成的细胞悬液分别施加于同一载玻片上的不同载玻孔中，待所述不同载玻片孔中的细胞悬液中的细胞均吸附后，在相同的条件下固定所述不同载玻片孔中的细胞；

所述多种病原体包括从呼吸系统感染病原体、消化系统感染病原体和生殖系统感染病原体中选择的任意一种病原体中的至少两种病原微生物，

在步骤S3中，所述相同的条件为在相同的温度条件下使用无水乙醇固定相同的时间，之后在湿度小于50％的同一湿度环境下干燥相同的时间形成所述细胞基片。

2.根据权利要求1所述的制备用于多病原体联检的细胞基片的方法，其特征在于，

所述相同的温度条件为环境温度选自范围23℃～27℃之间的同一温度，所述固定相同的时间是固定时间选自范围30min～3h之间的同一时间，所述干燥相同的时间是干燥时间选自范围30min～3h之间的同一时间。

3.根据权利要求2所述的制备用于多病原体联检的细胞基片的方法，其特征在于，

所述相同的温度条件是25℃，所述固定相同的时间是1h，所述干燥相同的时间是2h，所述无水乙醇为-20℃无水乙醇，

所述湿度小于50％的同一湿度是选自范围10％～20％之间的同一湿度，

在步骤S2中，细胞悬液的制备包括细菌悬液的制备和感染非细菌的细胞悬液的制备。

4.根据权利要求3所述的制备用于多病原体联检的细胞基片的方法，其特征在于，

所述细菌悬液的制备包括以下步骤：

将传代培养的细菌细胞放入无菌生理盐水中制成细菌悬液；

感染非细菌的细胞悬液的制备包括以下步骤：

步骤S21将多种病原体中的至少两种传代细胞分别用浓度范围在0.1％～0.5％之间的胰酶消化分离，待所述至少两种传代细胞脱离培养器皿的底时停止消化分离并吸出所述胰酶；

步骤S22将消化分离后的至少两种传代细胞分别置于湿度≥90％且温度37℃、CO₂浓度为5％的CO₂培养箱中吸附1h～3h；

步骤S23将吸附后的至少两种传代细胞的补充浓度范围在5％～20％的胎牛血清培养基，之后继续在湿度≥90％且温度37℃、CO₂浓度为5％的CO₂培养箱中感染细胞24h～96h，直至至少两种传代细胞中所有的病原体细胞均发生病变；

步骤S24将发生病变的至少两种传代细胞分别用浓度范围在0.1％～0.5％之间的胰酶消化分离，待所述至少两种感染的病原体细胞脱离培养器皿的底部时加入浓度范围在1％～5％之间的胎牛血清培养基停止消化，形成细胞悬液。

5.根据权利要求3所述的制备用于多病原体联检的细胞基片的方法，其特征在于，

所述感染非细菌的细胞悬液的制备包括以下步骤：

将所述多种病原体的细胞分别加入多种病原体中对应的病原体传代细胞中感染预定时间；

将多种病原体中的至少两种转染的病原体细胞分别进行细胞消化分离以确保细胞活力，将消化分离后的至少两种转染的病原体细胞继续培养至细胞发生病变，之后将发生病变的至少两种转染的病原体细胞制成细胞悬液；

其中，多种病原体的原代细胞不包括细菌细胞，

原代细胞与传代细胞的数量比例范围在1:2～1:1之间，感染预定时间的范围为24h～72h。