[发明专利]一种安全无毒的高通量无缝构建质粒的方法

权利要求书

1. 一种构建质粒的方法，其特征在于，将DNA片段加入由镁离子、PEG8000、核酸外切酶和Tris-HCl组成的反应体系中，反应后即得到重组质粒；所述DNA片段为利用高保真酶扩增得到，将扩增得到的含有DNA片段的PCR产物以体积比5%~50%的量添加至反应体系中；所述反应体系中氯化镁浓度为0.4~8.0 g/L；所述反应体系中PEG8000的浓度为0~80 g/L；所述核酸外切酶为T5核酸外切酶，所述T5核酸外切酶的浓度为0.05~1 μL/mL；所述Tris-HCl的pH为7.0~8.0，浓度为40~140 mL/L；其特征在于，在30~48℃下反应10~60 min；PCR产物之间含有重叠序列，每个重叠序列的长度不少于8个碱基，GC含量为10%~80%。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述DNA片段的数量不少于2个，任意两个DNA片段的体积比为1:(1~10)。

3. 一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒由PEG8000、氯化镁、T5核酸外切酶和Tris-HCl组成；所述PEG8000的工作浓度为0~80 g/L，所述氯化镁的工作浓度为0.4~8.0 g/L，所述T5核酸外切酶的工作浓度为0.05~1 μL/mL，所述Tris-HCl的工作浓度为40~140mL/L。

4.权利要求1或2所述方法，或权利要求3所述试剂盒在高通量筛选中的应用。