[发明专利]一种去除血浆中儿茶酚胺及其中间代谢物的方法及应用

说明书

本发明公开了一种去除血浆中儿茶酚胺及其中间代谢物的方法及应用。具体的说，本发明公开了一种去除血浆中肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)、甲氧基肾上腺素(MN)、多巴胺(DA)、甲氧基去甲肾上腺素(NMN)和3甲氧基酪胺(3‑MT)的方法。本发明包括如下步骤：首先通过固相萃取装置、吸附剂、超滤管对血浆进行处理，最后通过液相色谱串联质谱法进行检测，比较不同的处理方式，对血浆中儿茶酚胺及其中间代谢物的影响，从而筛选出较优的处理方式，得到空白血浆基质。本发明得到的空白血浆基质制备方法，可用于血浆中儿茶酚胺及其中间代谢物检测系统、平台、检测装置或试剂盒中空白样本的制备生产与应用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种空白血浆基质的制备方法及应用，尤其涉及一种去除血浆中儿茶酚胺及其中间代谢物的方法及应用。

背景技术

儿茶酚胺包括多巴胺、去甲肾上腺素和肾上腺素，其主要的代谢物有3-甲氧基酪胺、甲氧基去甲肾上腺素和甲氧基肾上腺素。儿茶酚胺及其中间代谢物的检测，是诊断来源于神经嵴的神经内分泌肿瘤如嗜铬细胞瘤、副神经节瘤及神经母细胞瘤的基石。

在临床检测儿茶酚胺及其中间代谢物时，检测样本为血浆，如果配置校准曲线的基质与待测样本相同或相似，就可以更好的保证实验方法的准确性和稳定性。虽然可以直接使用血浆作为校准曲线基质用于临床监测，但由于儿茶酚胺为内源性代谢物，血浆样本中存在一定量的儿茶酚胺及其中间代谢物，用未处理的血浆配置校准曲线会导致样品的检测结果偏低。因此需要去除血浆中的儿茶酚胺及其中间代谢物的空白血浆，用空白血浆配置校准曲线，保证检测得到的样本中的儿茶酚胺及其中间代谢物的含量更接近于真实值。

在先专利CN112730699A，公开一种用于检测血浆中儿茶酚胺及代谢物的方法及试剂盒，专利主要内容为儿茶酚胺及其代谢物的前处理方式及检测方法，且其标准品溶液的配置试剂为0.1mol/L的盐酸，并非是血浆，所以其测出的样品结果与真实值偏差较大。

在先专利CN202010012635.9公开一种血浆型冻干粉儿茶酚胺类物质及代谢物的质量控制物质制备和应用，该专利重点描述了血浆儿茶酚胺质控品的配置方式；对其中包含的空白血浆处理，仅通过活性炭进行处理，并未进行优化。

在先专利CN201710657234.7公开一种空白生物样本的制备方法，但其得到的是不含维生素的生物空白样本，非不含儿茶酚胺及其中间代谢物的空白样本。

在先专利CN202010927571.5公开一种空白血浆基质的制备方法及其应用，主要适用于维生素和抗生素类物质，对于儿茶酚胺及其中间代谢物的空白样本制备并不合适。

发明内容

鉴于此，本发明的目的在于提供一种空白血浆基质的制备方法及其应用。本发明公开了一种去除血浆中肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)、甲氧基肾上腺素(MN)、多巴胺(DA)、甲氧基去甲肾上腺素(NMN)和3甲氧基酪胺(3-MT)的方法。本发明包括如下步骤：首先通过固相萃取装置、吸附剂、超滤管等对血浆进行处理，最后通过液相色谱串联质谱法进行检测，比较不同的处理方式，对血浆中儿茶酚胺及其中间代谢物的影响，从而筛选出较优的处理方式，得到空白血浆基质。本发明得到的空白血浆基质制备方法，可用于血浆中儿茶酚胺及其中间代谢物检测系统、平台、检测装置或试剂盒中空白样本的制备生产与应用。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种空白血浆基质的制备方法，将血浆样品通过固相萃取、吸附和超滤处理后，获得空白血浆基质。

作为本发明的一个实施方案，将血浆样品先进行固相萃取，再进行吸附处理，离心后收集上清液，将上清液进行超滤处理，弃去滤出液，定溶后获得空白血浆基质。

进一步，所述空白血浆基质的制备方法包括如下步骤：

S1、用甲醇和水对官能化聚苯乙烯/二乙烯苯萃取柱(PEP柱)进行活化，弃去收集液；