[发明专利]一种毛囊干细胞的原代分离方法

权利要求书

1.一种毛囊干细胞的原代分离方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、将采集的头皮组织先用75%乙醇浸泡1-3分钟灭菌后，用含双抗的PBS清洗，去除多余的皮下脂肪组织；

步骤2、解剖镜下用灭菌的镊子取出单个毛囊；

步骤3、将单个毛囊加入到0.25%中性蛋白酶，37℃消化13-30分钟，去除真皮鞘；

步骤4、将去除真皮鞘的毛囊于0.25%胰蛋白酶中37℃消化10-20分钟，待细胞完全解离后，用含10%FBS和双抗的DMEM/F12完全培养基终止消化，然后用含双抗的PBS清洗两次；

步骤5、将清洗完的毛囊放置在直径10cm的培养皿中，用灭菌的手术刀或者手术剪切碎，分散在培养皿中，周围滴加50-100ul DMEM/F12完全培养基，润湿切碎的毛囊，使之贴壁，然后放入37℃、含5% CO₂的培养箱中，倒置培养2小时；之后，

步骤6、沿着培养皿壁缓慢添加5-10ml DMEM/F12完全培养基，完全没过碎毛囊；

前三天完全不动，第四天开始每3天隔着培养箱的玻璃观察是否需要添加培养基。

2.根据权利要求1所述毛囊干细胞的原代分离方法，其特征在于，步骤1为：将得到的头皮采用75%的乙醇浸泡1-3分钟，以灭杀可能存在的细菌、真菌，然后，再采用生理盐水或含双抗的PBS反复清洗，去除多余的皮下脂肪。

3.根据权利要求1所述毛囊干细胞的原代分离方法，其特征在于，步骤5中分散碎毛囊时，间距相隔为1cm。

4.根据权利要求1或3所述毛囊干细胞的原代分离方法，其特征在于，步骤5中，将清洗完的毛囊用灭菌的手术刀或者手术剪切碎，和分散在培养皿中操作均在装满冰的灭菌冰盒上进行。